Rapid genetic analysis in the diagnosis of primary Leber's hereditary optic neuropathy by using multiplex allele-specific polymerase chain reaction (MAS-PCR) with whole blood

Abstract

目的 探索一种简易、快速、高效的临床基因诊断分析原发性Leber's遗传性视神经病变(Leber's hereditary optic neuropathy,LHON)位点的新方法.方法 根据已知的LHON患者线粒体DNA上的3个原发性LHON致病突变位点(G11778A、T14484C和G3460A),设计3条突变位点特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)引物,直接以全血样为模板的等位基因特异性多重PCR(multiplex allelespecific polymerase chain reaction,MAS-PCR)分析3个原发性LHON致病突变位点.以此方法检测24例确诊的LHON患者,其中18例为线粒体DNA G11778A突变,4例为T14484C突变,2例为G3460A突变;同时,以20份正常血样标本作阴性对照.结果 优化的MAS-PCR条件为94℃/3 min,94℃/30 s、59.8℃/30 s、72℃/30 s,30个循环,72℃/3 min;以此方法检测了44份血样标本,其结果与预期结果一致,表明利用该方法筛查3个原发性LHON致病突变位点是可行的.同时,混和血液样本模拟实验结果显示,该方法可检测含多个原发性LHON致病突变位点的血液样本,且整个分析过程只需约2 h.结论 该方法直接以全血样作为PCR的模板,不需从血样中纯化DNA;单管一次性行PCR,可同时筛查3个原发性LHON致病突变位点.因此,该方法具有快速、高效、费用低、特异性好以及只需微量血液样本等优点。