Promoter methylation status of SFRP genes and induced apoptosis by demethylation in Jurkat cells

Abstract

目的探讨人T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞株Jurkat细胞分泌性卷曲相关蛋白（SFRP）基因甲基化及去甲基化诱导细胞凋亡对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法以不同浓度（1.0、2.0、4.0 µmol/L）5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对Jurkat细胞进行去甲基化处理，采用MTT法观察5-Aza-CdR对Jurkat细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测细胞凋亡率，甲基化特异性PCR(MSP)法检测药物处理前后SFRP基因的甲基化状态，实时荧光定量PCR检测SFRP基因以及RT-PCR检测survivin、c-myc和cyclin D1基因mRNA的表达改变，Western blot鉴定处理前后β-catenin的蛋白表达。结果1.0、2.0、4.0 µmol/L 5-Aza-CdR对Jurkat细胞的增殖有明显抑制作用，呈时间-剂量依赖性（P<0.05）；流式细胞术检测显示5-Aza-CdR作用Jurkat细胞48 h后，不同浓度5-Aza-CdR处理组与对照组比较细胞早期凋亡率明显升高（P<0.05）；SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因甲基化水平随5-Aza-CdR浓度升高而下降，呈剂量依赖性（P<0.05），同时mRNA表达水平较对照组明显上调（P<0.05）；Jurkat细胞总蛋白中β-catenin的蛋白表达随5-Aza-CdR浓度的升高而逐渐下降，呈剂量依赖性（P<0.05）；凋亡相关基因survivin、c-myc和cyclin D1的mRNA表达随5-Aza-CdR浓度的增高而降低，呈剂量依赖性（P<0.05）。结论逆转Jurkat细胞SFRP基因的甲基化，可以恢复SFRP基因转录表达，通过阻断β-catenin蛋白抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导细胞凋亡。