Produção in vitro de embriões bovinos em tubos sem controle da atmosfera gasosa

Abstract

Com a maior utilizacao da OPU existe a necessidade de encontrar alternativas para iniciar as primeiras fases da PIV sem controle da atmosfera. O desenvolvimento de um metodo pratico e simples de transporte/maturacao/fecundacao permitiria maior eficiencia do laboratorio e diminuicao dos custos de producao. O objetivo deste estudo foi desenvolver um metodo de maturacao e fecundacao para complexos cumulus oocitos (CCO) em tubos de polipropileno sem gaseificacao, mantidos em banho-maria. A maturacao in vitro em estufa foi conduzida em TCM-199 modificado (controle) enquanto que para os tratamentos em banho-maria, em tubos, o meio foi acrescido de 25mM de N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-acido etanosulfonico (HEPES). Na fecundacao in vitro dos oocitos em tubos, os CCO foram mantidos em banho-maria a 39°C em Talp-Fert, acrescido de HEPES em concentracoes entre 10mM a 28,7 mM por 10 a 18 horas, sob oleo mineral. O cultivo realizou-se em placas em bolsas gaseificadas com meio SOFaaci com soro de vaca em estro (SVE), sob oleo mineral, em estufa com 5,00%CO2 , 5,00%O2 e 90,00% de N2 a 39°C, por 9 dias. Verificou-se que CCO maturados por 24h em tubos nao gaseificados, mantidos em banho-maria tambem podem ser fecundados em meio Talp-Fert com 25 mM de HEPES, em tubos nao gaseificados, mantidos em banho-maria durante 10 horas. As taxas de clivagem, blastocistos em D7 e D9 em tubos nao gaseificados foram semelhantes (P>0,05) aos procedimentos em estufa. A fecundacao em Talp-Fert com 10 mM a 28,7 mM de HEPES em tubos mantidos em banho-maria prejudica o desenvolvimento embrionario quando conduzida por 18 horas.