Production and purification of epsilon prototoxin produced by Clostridium perfringens type D

Abstract

A prototoxina epsilon foi obtida a partir de cultivo liquido, rico em carboidratos, a partir de amostra de C. perfringens tipo D (INTA - Argentina), incubado em condicoes de anarobiose a 37oC por oito horas. O sobrenadante da cultura foi concentrado utilizando-se o sistema Amicon com membrana de cut off de 10 kDa. O concentrado foi precipitado com sulfato de amonio (350 g/ml) e dissolvido em tampao fosfato 0,01 M (pH 7,2). A prototoxina purificada por cromatografia de troca ionica (DEAE-Sepharose CL 6B) e isolada no primeiro pico, mostrou uma banda unica de aproximadamente 34kDa de peso molecular em SDS-PAGE, alem de ser toxica em camundongos.