Phenotypic and Genetic Analysis of Altered Variants of &lt;i&gt;Vibrio cholerae&lt;/i&gt; Biovar El Tor

S P Zadnova,N I Smirnova,A V Shashkova,Ya M Krasnov

doi:10.21055/0370-1069-2012-1(111)-57-61

Abstract

Determined is cholera toxin production by altered Vibrio cholerae O1 eltor strains, isolated on the territory of Russia in 1993-2010, which contain classical type ctxB gene. Studied are their genetic characteristics related to the production of this virulence factor. Determined is that altered eltor variants yield 10 to 20 times more cholera toxin than typical eltor strains. Changes in promotor region of ctxAB operon are not detected but elucidated is that 90 % of studied altered strains contain two copies of CTXϕ prophage in their genome whereas typical strains carry one copy of CTXϕ prophage. Despite the higher copy number of CTXϕ prophage, the identified differences in production of cholera toxin can be associated mostly with a change of transcriptional activity of regulatory genes. That causes the active production of cholera toxin by the altered variants of Vibrio cholerae eltor in non typical environment.

Highlights

Ключевые слова: измененные варианты V. cholerae биовара эльтор, продукция холерного токсина, копийность генов ctxAB, секвенирование промоторной области
Determined is cholera toxin production by altered Vibrio cholerae O1 eltor strains, isolated on the territory of Russia in 1993– 2010, which contain classical type ctxB gene. Studied are their genetic characteristics related to the production of this virulence factor
That causes the active production of cholera toxin by the altered variants of Vibrio cholerae eltor in non typical environment

Summary

Материалы и методы

В работе было использовано 23 штамма измененных вариантов и 11 типичных штаммов V. cholerae эльтор биовара, хранящихся в Государственной коллекции патогенных бактерий. Для культивирования бактерий использовали агар LB (рН 7,6). Определение биовароспецифических свойств осуществляли согласно МУК 4.2.2218-07 «Лабораторная диагностика холеры» [3]. Для изучения генетической организации сравниваемых штаммов использовали блот-гибридизац ию по Саузерну, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и секвенирование. Выделение ДНК, ДНК-ДНК гибридизацию осуществляли по методам, описанным в пособии по молекулярному клонированию [4]. Для определения количества гептапептидных последовательностей (TTTTGAT) в промоторной области ctxA проводили секвенирование на приборе «ABI RPISM® 3100 GeneticAnalyzer» (США), получая предварительно ампликоны на приборе «Терцик» (Россия) с использованием рассчитанного в данной работе прямого р15 ́-TGCCTAACAAATCCCGTCTGAGTTC-3 ́ и обратного р2-5 ́-ATGGGCGACAGGTCATCACATTTAC-3 ́ праймеров. Выравнивание и сравнение секвенированных нуклеотидных последовательностей осуществляли в программе «Mega4»

Результаты и обсуждение

Типичные штаммы эльтор биовара

Список литературы

Findings

Wiklund with visual