PCR 기법을 이용한 Phoma glomerate 의 특이검출

Abstract

Phoma glomerata는 식물 잎이나 열매에 병을 일으키는 식물병원균으로 알려져 있다. 국내에서는 아직 피해사례가 없기 때문에 P. glomerata는 국내의 식물검역균으로 관리되고 있다. 본 연구는 국내에 들어오는 목재나 과일에 P. glomerata를 검출할 수 있는 방법 개발코자 수행되었다. Phoma 균주들의 translation elongation factor 1 alpha 유전자 염기서열에 기초하여 P. glomerata 특이적 PCR 프라이머를 디자인 하였고 그 특이성을 검정하였다. PCR 수행 결과 P. glomerata에서만 170 bp 크기의 밴드가 증폭되었고, 다른 비교 균주에서는 밴드가 증폭되지 않았다. 검출 감도를 평가하기 위해 기존 PCR방법과 real time PCR 방법을 이용하여 실험한 결과 최소 10 pg과 1 pg까지 각각 검출할 수 있었다. 본 연구결과는 디자인된 PCR 프라이머가 P. glomerata를 특이적으로 검출하는데 유용할 것임을 보여준다. Phoma glomerata (Corda) Wollenw. & Hochapfel is a pathogenic fungus causing spot diseases of plant leaves and fruits. This fungus is important in plant quarantine of seedlings and fruits in Korea. The aim of this study was to develop a sensitive and effective diagnostic method for P. glomerata detection in imported plants. The fungal species-specific PCR primers were designed based on the nucleotide sequences of the translation elongation factor 1 alpha gene and their specificity and sensitivity were tested. The designed primers named as PhoGlo-F and PhoGlo-R amplified specifically a 170 bp sized DNA band of the target gene from the genomic DNA of P. glomerata. No amplicon was produced from genomic DNAs of 16 other Phoma spp. and reference fungal species tested. Moreover, PhoGlo-F/PhoGlo-R primers successfully worked with real-time PCR technique. The detection limit of DNA content by conventional and real-time PCR were 10 pg and 1pg of the genomic DNA of P. glomerata, respectively. We believed that the developed makers would be very useful for P. glomerata detection.