Otimização da análise da atividade da redutase do nitrato e sua caracterização em folhas de cana-de-açúcar

Carlos Leandro Rodrigues Dos Santos,Jairo Osvaldo Cazetta,Adhemar Sanches,Luciana Maria Saran

doi:10.1590/s0100-204x2014000500008

Abstract

O objetivo deste trabalho foi padronizar e caracterizar as condições para determinação da atividade da redutase do nitrato em tecido foliar de cana-de-açúcar, com uso do método in vivo. Amostras foliares foram coletadas de uma lavoura de primeira soqueira da cultivar IACSP 933046, com idade de seis meses. Foram estudadas diferentes condições de preparo das amostras foliares e do meio de incubação. O material que possibilitou a maior atividade da redutase do nitrato foi obtido pela amostragem de 25 discos de 1 cm de diâmetro, coletados às 13h, do centro da folha do tipo +1 sem nervura. O meio de incubação otimizado para a determinação da atividade dessa enzima em folhas de cana-de-açúcar deve ser composto por: 2,5 mL de KNO3 300 mmol L-1; 2,5 mL de tampão fosfato 285 mmol L-1 pH 7,3; 1,0 mL de Tween 20 a 0,6% (v/v); e 4,0 mL de água deionizada. A maior atividade da redutase do nitrato é obtida pela incubação das amostras por 90 min, a 32ºC, no escuro; é observada em plantas jovens formadas pela brotação da soqueira; e alcança o valor mínimo na fase de maturação das plantas.

Highlights

A cana‐de‐açúcar (Saccharum officinarum L.) é considerada a principal matéria prima para a produção de biocombustíveis renováveis no mundo (Miller, 2010); e, portanto, é grande o interesse por conhecimento relacionado à cultura
Leaf samples were collected from a first ratoon crop of the IACSP 933046 cultivar
The material that allowed the highest nitrate reductase activity was obtained by the sampling of 25 discs

Summary

Material e Métodos

A otimização e a caracterização do método para a estimativa da atividade da RN em plantas de cana‐de‐açúcar foram realizados em março de 2011. Foram coletadas folhas provenientes de cinco plantas amostradas ao acaso dentro do canavial. As análises para a caracterização da atividade da RN nas folhas de cana‐de‐açúcar foram realizadas em condições padronizadas, com execução da etapa anterior do experimento. Para a coleta das amostras de tecidos foliares frescos, foi necessária a definição da melhor posição na planta e da melhor porção da folha a ser coletada. Para determinar a posição da folha na planta, realizou-se ensaio cujas unidades experimentais foram provenientes de cinco plantas ao acaso dentro do canavial. Caracterização dos tratamentos aplicados aos diferentes ensaios para otimização do método para determinação da atividade da redutase do nitrato em tecidos foliares de cana‐de‐açúcar (Saccharum officinarum)

Número de repetições

Resultados e Discussão