Abstract
Aim. To optimize the technique for the isolation and storage of ribonucleic acid (RNA) from whole blood and leukocyte fraction.Materials and methods. Comparison of isolation quality was carried out for RNA samples obtained from 228 leukocyte samples and 198 whole blood samples. Isolation was performed from fresh and frozen samples using ExtractRNA™ reagent and a MagNA Pure Compact automated system. Various methods of removing erythrocytes (centrifugation and treatment with hemolytic agents from two manufacturers) were tested, as well as freezing with and without preservatives for subsequent RNA isolation.Results. Twenty-one combinations of conditions were tested. The highest quality RNA was isolated by manual extraction using the ExtractRNA™ reagent from a fresh leukocyte fraction, purified by the Amplisens hemolytic agent (successful extraction — 94%, median RIN=8,4); frozen in IntactRNA™, purified by leukocyte fraction centrifugation (successful extraction — 100%, median RIN=8); frozen in ExtractRNA™, purified by leukocyte fraction centrifugation (successful extraction — 100%, median RIN=9,3).Conclusion. RNA can be isolated from frozen blood fractions, which is not inferior in quality to that isolated from fresh samples. Thus, it is not necessary to isolate RNA immediately after the receipt of biological material.
Highlights
Были опробованы различные способы удаления эритроцитов — с помощью центрифугирования и обработки гемолитиками двух производителей, а также способы заморозки материала для по следующего выделения рибонуклеи новой кислоты (РНК) — с консервантами и без них
Biospecimens: Selection of the optimal storage temperature
Summary
Используемый биоматериал. 228 образцов лейкоцитарной фракции и 198 образцов цельной крови были получены из коллекции биобанка СПб ГБУЗ “Городская больница No 40” в период 11.2018-03.2020гг. 228 образцов лейкоцитарной фракции и 198 образцов цельной крови были получены из коллекции биобанка СПб ГБУЗ “Городская больница No 40” в период 11.2018-03.2020гг. Все документы в рамках научно-исследовательского проекта “Биобанкирование и биомедицинские исследования образцов тканей и жидкостей человека” были одобрены Экспертным советом по этике СПБ ГБУЗ “Городская больница No 40” на заседании No 119 от 09 февраля 2017г. Образцы крови были получены после подписания информированного согласия донорами биоматериала. Выделение РНК проводилось в рамках 21 комбинации параметров выделения. Пять комбинаций были исключены из последующего анализа по причине недостаточного количества образцов. Сравнение качества выделения проводилось для образцов РНК, полученных из 224 образцов лейкоцитарной фракции и 184 образцов цельной крови в условиях 16 различных комбинаций параметров выделения (таблица 1). Использование консервантов для хранения образцов перед выделением РНК.
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Free) 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
