Abstract
Full-size genes coding matrix proteins VP40 of Ebola virus (VE) and Marburg virus (VM) and nucleoprotein (NP) of VE were cloned. These genes expression in Escherichia coli and purification of their products by affinity chromatography using Ni-NTA agarose permitted to obtain full-size recombinant VP40 and NP proteins of filoviruses. Immunological studies showed the recombinant polypeptides to possess antigenic properties similar to those of the native viral proteins. These proteins can be used for constructing of experimental vaccines against filoviruses and improving immunodiagnostic tests against filoviral infections.
Highlights
Материалы и методыСеквенирование плазмид проводили по методу, описанному в работе [20] на автоматическом секвенаторе ДНК Beckman CEQ2000XL (Beckman Coulter, США) согласно инструкции фирмы-производителя, маркеры молекулярных масс белков («Sigma», США)
Семейство Filoviridae включает в себя два рода: Marburgvirus и Ebolavirus
These proteins can be used for constructing of experimental vaccines against filoviruses
Summary
Секвенирование плазмид проводили по методу, описанному в работе [20] на автоматическом секвенаторе ДНК Beckman CEQ2000XL (Beckman Coulter, США) согласно инструкции фирмы-производителя, маркеры молекулярных масс белков («Sigma», США). Для проведения непрямого ТИФА в качестве антигена использовали инактивированные препараты ВЭ и ВМ, полученные, как описано в [2, 5]. Места для неспецифического связывания антител на планшетах насыщали 0,5 % раствором казеина в течение 30 мин при 37 °С в ТСБ-Т буфере (трис-солевой буфер с твином), содержащем 0,15 M NaCl; 0,02M трис-HCl рН 7,4; 0,05 % твин-20. Содержащие вирусные или рекомбинантные белки, инкубировали с очищенными МКА, поликлональными антивирусными антителами или моносыворотками, специфичными к рекомбинантным белкам, 4 ч при 20–22 °С в буфере ТСБ-Т, содержащем 0,25 % казеина. Полоски мембраны промывали ТСБ-Т буфером и проявляли в растворе хромагена (1 мг/мл 3,3 диаминобензидин тетрагидрохлорида в 50 мМ трис-HCl буфере (pH 7,4), содержащем 0,145 М NaCl, 20 % этанола и 0,03 % перекиси водорода)
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
