Molecular typing of Brucella species in dairy farms in the Province of Azuay – Ecuador

Abstract

La Brucelosis es una enfermedad zoonótica extendida a nivel mundial en el ganado bovino, ocasionada principalmente por Brucella abortus, previamente reportada en ciertas regiones del Ecuador. La caracterización de las cepas circulantes de Brucella spp. en ganaderías lecheras resulta importante para comprender la epidemiología de esta enfermedad. La tipificación bacteriológica de la Brucella spp. es un proceso lento, riesgoso y requiere de laboratorios especializados. El objetivo de este estudio fue tipificar las cepas de Brucella spp. que afectan al ganado bovino en la provincia del Azuay, mediante ensayos moleculares, a partir de muestras de sangre y leche de vacas seropositivas a brucelosis. En fincas seropositivas a ELISA-Indirecto en leche, se seleccionaron 70 vacas Holstein mestizas, reactoras individualmente a las pruebas Rosa de Bengala y confirmadas con ELISA competitivo. Se extrajo el ADN de esas muestras de sangre y leche confirmando en un inicio la viabilidad del material genético de bovino con oligonucleótidos específicos para el género Bos. La amplificación de ADN para Brucella spp. se realizó por PCR-AMOS con cebadores de genero para la región IS711 y de especie para Brucella abortus, Brucella mellitensis, Brucella suis y Brucella ovis. Se pudo identificar ADN bovino en 65 (92,8 %) muestras de leche y en 62 (88,5 %) muestras de sangre. Un total de 62 muestras de ADN extraído de leche resultaron positivas (95,4 %) al género Brucella spp. y todas las muestras de sangre resultaron negativas. El PCR-AMOS mostró bandas con un peso molecular de 498 pb en muestras de cuatro animales correspondiente a B. abortus. Este es el primer estudio de identificación molecular en la provincia del Azuay con evidencia científica de la especie de Brucella spp. circulante en las ganaderías bovinas de la zona, contribuyendo de base para la identificación futura de los biovares de B. abortus aún no reportados en esta zona del país.