MiR-202 contributes to sensitizing MM cells to drug significantly via activing JNK/SAPK signaling pathway

Abstract

目的研究microRNA-202（miR-202）对多发性骨髓瘤（MM）细胞生长的影响，并初步探讨miR-202在MM细胞药物敏感性中的作用机制。方法荧光定量PCR检测miR-202及其靶基因B淋巴细胞刺激因子（BAFF）在MM细胞中的表达水平。将miR-202模拟物、miR-202抑制物、BAFF干扰质粒（siBAFF）及其阴性对照转染U266细胞，Western blot检测Bcl-2家族和MAPK信号通路蛋白的表达。WST-1法、流式细胞术（Annexin V-FLUOS）分别检测转染后U266细胞的增殖和凋亡情况。结果U266细胞、MM患者CD138+细胞中miR-202 mRNA表达（分别为0.052±0.009、0.304±0.354）均低于健康对照组（3.550±1.126）（P<0.001，P=0.009），BAFF表达水平（5.700±0.734、9.576±2.887）均高于健康对照组（1.819±0.853）（P<0.001，P=0.006）。miR-202模拟物转染组细胞增殖抑制率高于对照组[（56.04±0.02）％对（18.89±0.32）%，P=0.002]。Western blot结果显示，转染miR-202模拟物后，U266细胞Bcl-2表达下调约24%，而Bax蛋白的表达上调约1.24倍，miR-202模拟物组细胞凋亡率高于对照组[（49.60 ± 4.89）％对（26.20 ± 1.28）%，P=0.029]。硼替佐米和miR-202模拟物联合组细胞凋亡率为（51.23 ± 5.41）%，高于硼替佐米单独处理组（31.70 ± 4.40）％和硼替佐米与模拟物对照联合处理组[（51.23±5.41）％对（31.70±4.40）%，P=0.047；（51.23±5.41）％对（27.94±4.04）%，P=0.028）]，而miR-202模拟物联合沙利度胺和地塞米松与miR-202模拟物对照组相比差异无统计学意义[（11.66±1.91）％对（10.63±1.74）%，P=0.700；（16.35±1.32）％对（17.43±1.95）%，P=0.400]。miR-202模拟物联合硼替佐米对U266细胞的增殖抑制率高于硼替佐米单独处理组[（36.93±5.98）%对（18.18±4.10）%，P=0.029]。miR-202模拟物及硼替佐米处理U266细胞后，p-JNK蛋白表达水平下调。结论miR-202模拟物和硼替佐米可协同抑制MM细胞增殖、诱导其凋亡，可能通过miR-202负向调控靶基因BAFF的表达、抑制JNK/SAPK信号通路的活化来实现的。