MicroRNA-138 regulates cell adhesion-mediated drug resistance phenotype by targeting SGTA in non-Hodgkin's lymphoma

Abstract

目的分析microRNA-138（miR-138）靶向调节小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α（SGTA）对非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞黏附介导的耐药（cell adhesion-mediated drug resistance, CAM-DR）的影响。方法以HS-5细胞或纤连蛋白（FN）构建NHL细胞黏附模型；Western blotting与RQ-PCR分析miR-138对SGTA蛋白及mRNA表达的影响；双荧光素酶报告基因活性检测分析miR-138对SGTA mRNA 3′UTR活性的影响；分别用miR-138下调慢病毒载体（Lv-shmiR-138）、miR-138过表达慢病毒载体（Lv-miR-138）、对照慢病毒载体（Lv-Ctrl）感染Daudi及OCI-Ly8细胞，分析miR-138对细胞周期、黏附能力及CAM-DR的影响；收集35例弥漫大B细胞淋巴瘤患者的石蜡组织标本，分析miR-138的表达情况及其与疾病进展和耐药关系。结果①NHL细胞与FN或HS-5细胞黏附培养后miR-138表达水平显著高于悬浮培养组（P值均<0.05）。②下调miR-138的表达可增强SGTA蛋白的表达水平（P值均<0.05），而对SGTA mRNA的表达水平无显著影响（P值均>0.05）。③转染野生型SGTA 3′UTR载体时，过表达miR-138可显著抑制荧光素酶报告基因活性（0.73±0.03对1.00±0.02，t=0.914，P=0.002）；而转染结合位点突变的突变型载体时，过表达miR-138不能显著改变报告基因活性（0.93±0.04对1.00±0.02，t=1.375，P=0.241）。④在悬浮及黏附培养状态下，过表达miR-138可显著诱导Daudi及OCI-Ly8细胞G1期停滞（P值均<0.05）。⑤下调miR-138的表达对Daudi及OCI-Ly8细胞的黏附能力均无显著影响（P值均>0.05）。⑥在悬浮培养状态下调miR-138的表达时，多柔比星诱导细胞死亡的比例显著下降，而在黏附培养状态下调miR-138的表达，多柔比星诱导细胞死亡的比例显著上升（P值均<0.05）。⑦miR-138在进展及稳定患者中的表达水平显著高于完全缓解以及部分缓解患者，差异具有统计学意义（9.72±1.11对3.06±0.22，t=9.144，P<0.001）。结论在黏附微环境中miR-138可通过靶向抑制SGTA诱导细胞周期G1期停滞促进CAM-DR进程。