Microbiological and molecular determination by real-time PCR of two bacteria of the genus Bacillus of agro biotechnological interest

Abstract

Se efectuó la comparación de curvas de crecimiento a diferentes rangos de pH, salinidad y temperatura, además se determinó el tamaño, forma y posición de endospora de dos diferentes cepas del género Bacillus. Para la identificación molecular se realizó la extracción de ácidos nucleicos, utilizando el kit High Pure PCR Template Preparation Kit de Roche® y posteriormente se analizaron las curvas de amplificación producto de la PCR en Tiempo Real. Se realizaron cinéticas de crecimiento a cada uno de los cultivos de bacterias durante 72 horas y se analizaron estadísticamente las curvas mediante los métodos estadísticos ANOVA y Tukey para determinar significancia (p˂0.001). El análisis factorial para la variable “temperatura” no mostró una diferencia significativa entre cepas y tampoco con los valores fijados (28, 32, 37 °C), la variable “pH” si presentó una interacción con valores (p<0.0001) entre cepas; la variable “salinidad” también presentó diferencia significativa entre cepas y con sus respectivas interacciones. En el análisis del área bajo la curva, la variable “temperatura” no mostró diferencia significativa, mientras que las variables “pH y salinidad” presentaron valores correspondientes a (p<0.0001). Para la determinación molecular, se analizaron las curvas de amplificación, confirmando la presunción bioquímica de la cepa BM como B. megaterium mediante el análisis del gen phaC, así como también se pudo corroborar que la cepa BL corresponde a B. licheniformis al analizar el gen lchAA. La cinética bacteriana permitió establecer las horas clave para el análisis del crecimiento, confirmando que las características analizadas corresponden a especies pertenecientes a la familia Bacillaceae, con aplicación como controladores biológicos en la agricultura.