Lentivirus-mediated stable silencing of nm23-H1 gene in lung cancer cells and the influence on biological behavior

Abstract

背景与目的nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因。前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力。为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制，本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株。方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549，通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-H1基因表达，并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证，侵袭小室实验检测侵袭力改变。结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低；shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1的正常表达；侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强。结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99，nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强。