Isolation of Marek's disease virus: revisited

Abstract

Splenocytes from chickens infected with low-passage stocks of Marek's disease virus (MDV) RB-1B, a very virulent (vv) strain and vv+ RK-1 were used to compare the efficacy of chick kidney cells (CKC), chicken embryo fibroblasts (CEF) and chicken embryo kidney cells (CEKC) for virus isolation. CKC were superior to CEF and CEKC. MDV foci were present at 4 days post infection in CKC but not until 6 days post infection in CEF or CEKC. Virus yield was higher in CKC than in CEF or CEKC at 6 days post infection. Passage of RB-1B in CKC yielded a significantly higher virus increase than with CEF or CEKC. The same was true for RK-1 comparing CKC with CEKC. Interestingly, RK-1-infected CEF were negative or had very low number of foci in passage 1, but virus yield increased 500-fold to 600-fold on passage in CKC, CEF, and CEKC. Recommendations on procedures for successful virus isolation are provided. Les splénocytes de poulet infectés par du virus de la maladie de Marek (MDV) correspondant aux premiers passages d'une souche très virulente (vv) RB-1B et d'une souche hypervirulente vv+RK-1, ont été utilisés pour comparer l'efficacité des cellules de rein de poussin (CKC), des fibroblastes d'embryon de poulet (CEF) et des cellules embryonnaires de reins de poulet (CECK). Les CKC ont été supérieurs aux CEF et aux CECK. Les foyers de MDV ont été mis en évidence le 4è jour après l'infection (dpi) pour les CKC mais pas avant le 6è dpi pour les CEF et CECK. La récolte de virus a été supérieure avec les CKC qu'avec les CEF ou CECK au 6è dpi. Le passage de RB-1B sur CKC a donné des quantités significativement supérieure en virus par rapport au passage sur CEF ou CECK. Les mêmes résultats ont été obtenus avec RK-1 en comparant CKC et CECK. D'une manière intéressante, les CEF infectés par RK-1 ont été négatifs ou présentaient des foyers en nombre très faible au premier passage, mais la quantité de virus récoltée a augmenté de 500 à 600 fois en passant sur CKC, CEF et CECK. Les recommandations sur les procédures de l'isolement de virus avec succès sont fournies. Für den Vergleich der Eignung von Hühnernierenzellen (CKC), Hühnerembryofibroblasten (CEF) und Hühnerembryonierenzellen (CEKC) zur Virusisolierung wurden Milzzellen von Hühnern, die mit einer niedrigen Passage des hochvirulenten (vv) Stammes RB-1B des Virus der Marekschen Krankheit (MDV) infiziert worden waren, und der vv+ RK-1-Stamm verwendet. CKC waren den CEF und den CEKC überlegen. In CKC traten MDV-Plaques am 4. Tag nach der Infektion (dpi) auf, in CEF und CEKC jedoch nicht vor dem 6 dpi. Die Passagierung von RB-1B führte in CKC zu einem signifikant höheren Virustiteranstieg als in CEF oder CEKC. Das gleiche galt für RK-1 beim Vergleich von CKC und CEKC. Interessanterweise waren RK-1- infizierte CEF in der 1. Passage negativ oder wiesen nur eine sehr geringe Zahl von Plaques auf, aber der Virusgehalt stieg nach Passagierung in CKC, CEF und CEKC um das 500- bis 600-fache an. Die Anzüchtungsanforderungen für eine erfolgreiche Virusisolierung werden beschrieben. Se utilizaron esplenocitos de pollos infectados con estoc de pocos pases de virus de Marek (MDV) RB-1B, una cepa muy virulenta (vv) y vv+ RK-1 para comparar la eficacia de células de riñón de pollo (CKC), fibroblastos de embrión de pollo (CEF) y células de riñón de embrión de pollo (CEKC) para el aislamiento del virus. Las CKC fueron superiores a las CEF y CEKC. Se observaron focos de MDV a los 4 días post infección (dpi) en CKC, pero no hasta 6 dpi en CEF o CEKC. Los rendimientos víricos fueron superiores en CKC respecto a CEF o CEKC a los 6 dpi. Pases de RB-1B en CKC produjeron un incremento del virus significativamente más elevado que con CEF o CEKC. Interesantemente, CEF infectados con RK-1 fueron negativos o presentaron un bajo número de focos en el pase 1, pero el virus incrementó 500 o 600 veces en pases en CKC, CEF y CEKC. Se proponen algunas recomendaciones sobre los procedimientos para poder aislar satisfactoriamente este virus.