Isolation of Density Enrichment Fraction of Adipose-Derived Stem Cells from Stromal Vascular Fraction by Gradient Centrifugation Method

Abstract

배경: 지방조직은 골수 유래의 중간엽 줄기세포와 같은 다분화 능력을 가진 성체줄기세포를 포함한다. 지방조직으로부터 추출한 지방유래 줄기세포가 다양한 분화 유도를 통해 지방세포, 골세포, 근육세포로 분화할 수 있음이 밝혀졌다. 본 연구에서는 지방조직으로부터 얻은 기질세포에서 지방세포로의 탁월한 분화능력을 가지고 있는 순수한 지방유래 줄기세포를 추출해 낼 수 있는 지 알아보았다. 방법: 수컷 Sprague-Dawley 쥐(n=15)의 4부위 지방조직(피하 지방, 부고환 지방, 장간막 지방, 후복막 지방)에서 불필요한 조직을 제거한 나머지 기질세포만을 얻는다. Nycodenz를 이용하여 기질세포를 밀도차등원심분리하여 4개의 분획을 얻어 각각을 배양시킨다. 포화 상태에 이른 지방줄기세포를 지방세포로 분화를 유도하여 세포 내 지방 축적 여부를 염색을 통해 확인한다. 결과: 밀도차등 원심불리로 지방조직 기질세포는 4개의 분획(Fx-1, Fx-2, Fx-3, Fx-4)으로 나뉘었으며, 4부위 지방조직 모두 세 번째 분획(Fx-3)의 세포 수가 가장 많았다. 그러나 지방세포로의 분화는 4부위 지방조직 모두 두 번째 분획(Fx-2)에서 탁월했으며 분획을 나누지 않은 것(control)과 비교했을 때 더 나은 분화 능력을 보였다. 지방으로 분화가 가장 잘 되는 지방 조직은 retroperitoneal fat tissue였으며 그 다음이 subcutaneous fat tissue였고, epididymal fat tissue는 상대적으로 분화율이 떨어지는 것을 관찰하였다, Mesenteric fat tissue는 분화가 거의 되지 않았다. 결과: 지방조직별, 밀도별로 지방조직 기질세포를 나누어 분리함으로써 지방조직으로의 분화 능력이 우수한 지방줄기세포를 찾을 수 있었다. 향후 지방줄기세포를 이용한 연구 및 활용에 있어서 지방조직별, 분획별 기질세포의 이용으로 일관된 결과를 얻는 데 도움이 될 것이다.