Isolation and identification of CD133 positive and negative cells from human lung cancer and screening of the differential genes between the positive and negative cells

Abstract

背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs），肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异，而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物，因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究通过分选人肺腺癌A549细胞中的CD133阳性及CD133阴性细胞，鉴定两组细胞的生物学特性并在人组织标本进行验证，利用基因芯片筛选转移相关差异基因。方法采用磁式分选（magnetic activated cell sorting, MACS）的方法对人肺腺癌A549中CD133阳性细胞、CD133阴性细胞进行分选，通过无血清条件培养、平板克隆、血清诱导分化及基因芯片等实验，比较两组细胞“sphere”形成、细胞增殖、细胞分化以及差异基因，并在人组织标本进行CD133表达与临床特性的验证分析。结果CD133阳性细胞能在无血清培养基中悬浮生长并形成“sphere”；其平均克隆形成率（57.1%）明显高于CD133阴性细胞（3.3%）；CD133阳性细胞能被血清诱导分化、表达腺癌标志物CK7；两组细胞中的19个转移基因表达水平相差两倍或以上，差异最高达12倍；肺癌组织中CD133阳性细胞主要分布于癌巢周边，数量稀少，其表达与肿瘤组织学分型、分级及临床分期无关。结论CD133阳性肺腺癌A549细胞具有CSCs特性；两组细胞在转移相关基因的表达存在明显差异，其中CD82可能在CD133阳性细胞的转移机制中起重要作用。