In house validation of an HPLC-DAD method for the simultaneous determination of specific bioactive compounds in southern Brazilian propolis

Abstract

The levels of selective bioactive compounds in propolis produced in the state of Paraná, Brazil, were compared with green (São Paulo and Minas Gerais), brown (Santa Catarina), and red (Bahia) propolis. The suitability of the HPLC-DAD method was checked: R2 > 99% and no evidence of lack-of-fit (p > 0.01); recoveries within 84.30–119.52% (only 3,4-di-O-caffeoylquinic acid recovery was higher, namely 138.77%); precision up to 11.76% (repeatability) and 14.56% (intermediate); LODs and LOQs of 0.74–3.02 µg/ml and 2.48–10.07 µg/ml, were achieved. p-coumaric and 4-hydroxy-3,5-diprenylcinnamic acids and kaempferide were widely spread in Brazilian propolis. Also, high levels of 3,5-di-caffeoylquinic and 3,4-di-O-caffeoylquinic acids were found in most propolis from Paraná and in green propolis; 4-O-caffeoylquinic acid was abundant in most propolis from Paraná but not in propolis from Minas Gerais, Santa Catarina, and Bahia.En validación de un método de HPLC-DAD para la determinación simultánea de compuestos bioactivos en el propóleos Brasileño surLas concentraciones de compuestos orgánicos específicos y bioactivos presentes en el propóleos producido en el estado de Paraná fueron determinadas y comparadas con las del propóleos verde (São Paulo y Minas Gerais), marrón (Santa Catarina) y rojo (Bahia). La idoneidad del método HPLC-DAD fue verificada y fueron obtenidos los siguientes resultados: R2>99%, sin indicios de falta de ajuste (p > 0.01); recuperaciones entre 84,30-119,52% (solamente el ácido 3,4-di-O-cafeoilquinic tuvo recuperación de 138,77%); precisión de 11,76% (repetividad) y 14,56% (precisión intermedia); LD y LC de 0,74-3,02 µg/ml y 2,48-10,07 µg/ml. Los ácidos p-cumárico y 4-hidroxi-3,5-diprenilcinamico y flavonoides están en niveles altos en muchas muestras de propóleos colectadas en Paraná; principalmente la canferida está ampliamente distribuida en el propóleos encontrado en Brasil. Niveles altos de los ácidos 3,5-di-cafeoilquinico y 3,4-di-O-caffeoilquinico fueron encontrados en la mayoría de las muestras de propóleos del estado de Paraná y en el propóleos verde; el ácido 4-O-cafeoilquinico fue encontrado en altas concentraciones en el propóleos de Paraná pero no en el propóleos de los estados de Minas Gerais, Santa Catarina y Bahia.