Abstract
O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os genes cry3, vip1, vip2 e vip1/vip2 em uma coleção de 1.078 isolados de Bacillus thuringiensis potencialmente tóxicos para larvas de coleópteros. Foram utilizados pares de oligonucleotídeos iniciadores gerais obtidos a partir de regiões conservadas dos genes e do alinhamento de sequências consenso. Posteriormente, os isolados positivos foram caracterizados por meio da técnica de PCR‑RFLP, tendo-se utilizado enzimas de restrição específicas, para identificar novas subclasses de genes nos isolados. Cento e cinquenta e um isolados foram positivos para os genes avaliados, com maior frequência para o gene vip1/vip2 (139 isolados). Pela técnica de PCR‑RFLP, foram observados 14 perfis polimórficos, o que indica a presença de diferentes alelos e, consequentemente, de distintas subclasses desses genes.
Highlights
Material e MétodosForam utilizados 1.078 isolados de B. thuringiensis pertencentes à coleção do Laboratório de Genética de Bactérias, da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, da Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, SP
The objective of this work was to identify and characterize cry3, vip1, vip2 and vip1/vip2 genes in a collection of 1,078 Bacillus thuringiensis isolates potentially toxic against Coleoptera larvae
Alguns isolados de B. thuringiensis são capazes de sintetizar outras proteínas tóxicas durante a fase de crescimento vegetativo, as quais não formam cristais e não têm homologia com as proteínas Cry
Summary
Foram utilizados 1.078 isolados de B. thuringiensis pertencentes à coleção do Laboratório de Genética de Bactérias, da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, da Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, SP. A técnica de PCR foi utilizada para identificar os genes cry, vip, vip e vip1/vip no DNA dos isolados de B. thuringiensis. Após a realização das restrições, um volume de 10 μL de cada amostra, acrescido de 3 μL de tampão de "loading buffer", foi aplicado em gel de agarose a 1,5%, contendo brometo de etídio (0,5 μg mL‐1) e, em seguida, foi submetido à eletroforese horizontal em cuba Sunrise por 2 horas a 100 V, em tampão TBE 1X, adicionado de brometo de etídio (0,5 μg mL‐1). Utilizou-se uma amostra de DNA com fragmentos de tamanhos conhecidos, múltiplos de 1 kb ("1 kb DNA ladder") (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), a qual foi utilizada para verificação dos tamanhos dos fragmentos obtidos nas reações de restrição, além de uma amostra do produto amplificado, não restringido, obtido para a linhagem B. thuringiensis var. Iniciadores utilizados para amplificação dos genes cry, vip, vip e vip1/vip de isolados de Bacillus thuringiensis e tamanho dos produtos amplificados
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