Identificación y clonación de tres genes endógenos que pueden conferir resistencia a patógenos en cítricos incluyendo CLas y CTV

Abstract

<em>Candidatus</em> Liberibacter asiaticus (<em>C</em>Las), agente causal del huanglongbing (HLB), y el <em>Citrus tristeza virus</em> (CTV) constituyen amenazas para la citricultura mexicana por su condición endémica en cítricos agrios de algunas regiones del pacífico y de focos recientes de razas severas, respectivamente. La identificación y clonación de genes relacionados con la Resistencia Sistémica Adquirida (RSA) de la planta podrían coadyuvar como parte de una estrategia de manejo integrado. Este trabajo tuvo como objetivo desarrollar construcciones con genes específicos inherentes a la planta como primera etapa en la generación de plantas transgénicas resistentes a <em>C</em>Las. Los genes seleccionados con base a la respuesta de cítricos a una amplia gama de patógenos, fueron <em>AZI-1</em>, 1-inductor del ácido ‘Azelaic’ y <em>CsNDR-1</em>, 1-resistencia no específica a enfermedades en cítricos, ambos genes reguladores de la señalización del ácido salicílico (SA), y el gen asociado con la síntesis de proteína 1 relacionada con la patogenicidad (<em>PR-1</em>). Los tres genes (<em>AZI-1, PR-1</em> y <em>CsNDR-1</em>) se insertaron independientemente en pUC118-FMV-Poly-2-1. Posteriormente estos tres genes fueron subclonados individualmente en el vector pCAMBIA 2301, mientras que en pCAMBIA 2201 se clonó el gen <em>AZI-1</em>. La clonación de los genes en los vectores pCAMBIA2301 y pCAMBIA2201 permitió incorporar a las construcciones un gen de selección de transformación (35S-nptII-35S) y un gen reportero (35S-GUS-NOS). La construcción <em>CsNDR-1</em> fue clonada en las cepas EHA5 y AgL1 de <em>Agrobacterium tumefaciens</em>. Los genes <em>AZI-1</em> y <em>PR-1</em> no se lograron integrar a estas cepas de <em>Agrobacterium</em>. Estas construcciones representan el primer paso para generar cítricos transgénicos como una alternativa para enfrentar a <em>C</em>Las y CTV.