Ibrutinib inhibits mesenchymal stem cells-mediated drug resistance in diffuse large B-cell lymphoma

Abstract

目的探讨依布替尼克服弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞耐药的机制。方法①体外实验：以DLBCL细胞系SUDHL10细胞（GCB亚型）、HBL-1（ABC亚型）以及8例DLBCL患者原代细胞为研究对象，与正常人骨髓基质细胞（MSC）共培养后，显微镜下计数向MSC趋化迁移及与MSC黏附的DLBCL细胞数，ELISA法检测MSC的CXCL12表达水平，流式细胞术检测DLBCL细胞的CXCR4表达水平；以携带有CXCR4的慢病毒转染HBL-1细胞，米托蒽醌、依布替尼处理后与MSC共培养，流式细胞术检测细胞凋亡水平；倒置显微镜下观察HBL-1细胞集落形成情况。②体内实验：以HBL-1细胞构建的NOD/SCID肿瘤模型小鼠为研究对象，观察依布替尼治疗后肿瘤体积变化。结果①依布替尼处理后，DLBCL细胞向MSC的迁移数和与MSC的黏附比例明显降低（P值均<0.05），并呈剂量依赖性。②与依布替尼处理前比较，处理后MSC的CXCL12表达水平降低（SUDHL10细胞：660 pg/ml对1 400 pg/ml，P=0.004；HBL-1细胞：720 pg/ml对1 490 pg/ml，P=0.018；DLBCL原代细胞：850 pg/ml对1 450 pg/ml，P=0.004），DLBCL细胞的CXCR4表达水平降低（P值均<0.05）。③共培养时，对照组、米托蒽醌组、依布替尼组、米托蒽醌组+依布替尼组的HBL-1细胞凋亡比例分别为15.1%、17.5%、23.5%、58.7%，转染过表达CXCR4后，HBL-1细胞凋亡比例分别为14.2%、16.1%、22.5%、38.3%，共培养联合用药组HBL-1细胞凋亡比例高于单药培养组，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。④对照组、MSC组、依布替尼组、MSC组+依布替尼组集落数分别为113±5、205±4、62±9、123±3（每孔2.5×103），模型小鼠皮下肿瘤体积分别为6 500、17 000、4 000、10 000 mm3，依布替尼处理后较处理前集落数和肿瘤体积明显减少，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。结论依布替尼靶向作用于CXCL12/CXCR4轴，抑制CXCR4表达从而克服MSC介导的耐药作用，并且能够在体内外抑制MSC促淋巴瘤细胞集落形成的作用。为依布替尼治疗复发耐药DLBCL提供了理论依据。