High resolution melting analysis for detecting p53 gene mutations in patients with non-small cell lung cancer

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背景与目的p53基因与人类多种肿瘤相关，突变型具有致癌作用，主要分布在外显子5-8。本研究旨在建立高分辨熔解曲线（high resolution melting, HRM）检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者p53基因突变的方法，探讨p53基因突变的特点及其在NSCLC发生发展中的演变规律。方法采用HRM法检测264例NSCLC患者肿瘤组织和54例癌旁肺组织p53基因外显子5-8的突变，突变样品进一步使用PCR产物直接测序法分析确定突变类型；HRM法检测阳性而PCR产物直接测序法检测阴性的样品，进一步进行亚克隆测序证实。结果54例对照未发现突变。264例肿瘤组织中，HRM法检出p53基因突变104例，102例得到PCR产物直接测序法证实，突变率为39.4%；95例为点突变，7例为碱基插入和缺失导致的移码突变。p53外显子5-8的突变率分别为11.7%、8%、12.5%和10.6%，差异无统计学意义（P=0.35）。p53基因突变与性别有关，与其它临床病理特征无关。结论HRM法筛选p53基因突变样品，具有操作简便、快速、敏感、单管避免污染等优点，值得推广。p53基因的突变特点提示，p53基因突变是自发性突变，可能是DNA合成和修复过程中的随机错误所致。