СHANGES OF TLR GENE EXPRESSION IN CERVICAL EPITHELIUM FROM THE PATIENTS WITH UROGENITAL INFLAMMATORY DISEASES

O A Svitich,L V Shibina,L V Gankovskaya,I I Zaitseva,L I Krasnoproshina

doi:10.15789/1563-0625-2015-3-269-274

Abstract

Toll-like receptors (TLR) are involved into innate immune recognition of microorganisms, including pathogenic bacteria. The aim of this work is to assess relative levels of TLR2 and TLR9 expression in cervical epithelial cells of women with inflammatory diseases of pelvic organs. The total group of patients consisted of 47 persons, including 20 women with urogenital infections, and 27 women comprised a control group. Using real-time PCR, we identified the opportunistic pathogens and gene expression levels of TLR2, TLR9 in the cervix epithelial cells. It was shown that expression of TLR9 in the group with urogenital infections was 13.7-fold higher than in control group. We have revealed that a significant increase of TLR9 expression in the mucosal epithelium from cervical canal correlated with detection of infectious pathogens in the samples.

Highlights

Общее количество пациентов составило 47 человек, из них 20 женщин, больных воспалительными заболеваниями органов малого таза и 27 женщин, которые составили контрольную группу
Последовательность праймеров и зондов TLR2 и TLR9 для реакции подбирали с помощью программы Vector NTI 8.0, анализируя последовательность мРНК, полученную из электронной базы данных GenBank
We have revealed that a significant increase of TLR9 expression in the mucosal epithelium from cervical canal correlated with detection of infectious pathogens in the samples

Summary

Материалы и методы

Общее количество пациентов составило 47 человек, из них 20 женщин, больных воспалительными заболеваниями органов малого таза и 27 женщин, которые составили контрольную группу. Для выделения ДНК микроорганизмов рода Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis и Clamydia trachomatis из клеток цервикального канала женщин с инфекционно-воспалительными патологиями использовали «ДНК-Сорб-АМ вариант 100» (ИнтерЛабСервис, РФ). Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (ПЦР-РВ) проводили в амплификаторе ДТ-96 (ДНК-технология, РФ) с использованием следующих наборов: «АмплиСенс® C.trachomatis-скрин--титр-FL», «АмплиСенс® M.hominis-скрин-титр-FL», «АмплиСенс® U.parvum/ U.urealyticum- скрин-титр-FL» (ИнтерЛабСервис, РФ). Для определения уровней экспрессии генов TLR2 и TLR9 в эпителиальных клетках цервикального канала проводили выделение РНК, далее реакцию обратной транскрипции и ПЦРРВ. На следующем этапе исследований проводили реакцию обратной транскрипции с использованием «Набора реагентов ОТ-1 для обратной транскрипции» (Синтол, РФ) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Реакционную смесь готовили из реактивов «Набора для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I» (Синтол, Россия), согласно рекомендациям фирмы-производителя. Реакцию ПЦР-РВ проводили в амплификаторе ДТ-96 (ДНК-технология, РФ). Для сравнения групп данных использовали непараметрические методы статистической обработки данных (критерий Манна–Уитни) [4]

Результаты и обсуждение

Findings

Обострение Хроническое течение