Green fluorescent protein purification through Immobilized Metal Affinity Chromatografy (IMAC) and its relevance for Biomedical Science students during Biochemistry practical classes at La Trobe University – Australia

Abstract

Este trabalho foi realizado como prática integrada da disciplina de Bioquímica no curso de graduação em Ciências Biomédicas, objetivando demonstrar técnicas utilizadas para a purificação da Proteina Fluorescente Verde (GFP). Para realização dos experimentos foi utilizada como metodologia principal a Cromatografia de Afinidade por Metal Imobilizado (IMAC). A região de abertura para alongamento da GFP foi subclonada dentro de um vetor de expressão chamado pQE30. A produção subsequente da proteína marcada com hexahistidina na região N-terminal, facilitou sua purificação pela IMAC. Uma purificação de aproximadamente três vezes mais que a esperada da GFP foi obtida. Dessa forma, os estudantes completaram o curso adquirindo significante experiência em relação às técnicas fundamentais na área molecular relacionadas à clonagem e princípios de expressão e purificação de proteínas recombinantes.