Functional study of hENT1 on SKM-1 cell resistance to decitabine

Abstract

目的观察干扰1型平衡核苷转运体（human equilibrative nucleoside transporters 1，hENT1）表达后，地西他滨（DAC）对人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞系SKM-1细胞的增殖、凋亡和去甲基化的影响。方法采用慢病毒干扰技术沉默SKM-1细胞中hENT1，采用RT-PCR方法检测靶细胞内hENT1 mRNA表达水平，采用CCK-8法检测不同浓度DAC(0.5、1、5 µmol/L)作用24、48及72 h对hENT1沉默SKM-1细胞的增殖抑制情况，应用流式细胞术及Western blot法观察DAC诱导的凋亡情况，采用甲基化特异性PCR检测p15INK4B去甲基化水平，分析hENT1沉默后DAC的去甲基化作用。结果hENT1干扰组hENT1 mRNA表达水平（0.253±0.030）相对于对照组（1.000±0.091）显著降低（P<0.01）；经0.5、1、5 µmol/L DAC作用24、48及72 h后，相对于同时期对照组，hENT1干扰组的增殖抑制率均明显下降（P<0.05），其中5 µmol/L DAC作用72 h最为明显，hENT1干扰组和对照组分别为（49.41±4.02）%和（33.03±2.47）%（P=0.007）；hENT1干扰组Caspase-3的剪切体水平及AnnexinⅤ+细胞比例减少，并且p15INK4B去甲基化水平也显著降低。结论hENT1沉默后SKM-1细胞对DAC诱导的凋亡及去甲基化作用敏感性下降。