Extraction, Characterization and Partial Purification of the Pectin Lyase from Passiflora edulis f. flavicarpa O. Deg mesocarp

Abstract

A Passiflora edulis f. flavicarpa O. Deg (maracuja amarelo) e um fruto amplamente cultivado, consumido e industrializado no Brasil, principalmente na producao de sucos. A casca do maracuja e constituida essencialmente pelo mesocarpo (albedo), rico em pectina e por isso poderia ser utilizada em processos industriais, mas devido a presenca da acao de enzimas pectinoliticas, como a pectina liase (PL), a casca fica sem valor nutricional. Neste contexto o presente trabalho visa a extracao, caracterizacao enzimatica e purificacao parcial da PL a partir do albedo de Passiflora edulis f. flavicarpa O. Deg. Os ensaios abrangeram as etapas de: preparo da amostra por meio do isolamento do albedo, protocolo de extracao enzimatica, caracterizacao da faixa de pH mais adequada, concentracao do extrato (20 g L -1 ; 35 g L -1 e 70 g L -1 ), precipitacao com etanol (30% e 60%), cromatografia de troca ionica, analise eletroforetica e teste de atividade final com a PL parcialmente purificada. Apos preparo da amostra e extracao enzimatica, a PL promoveu maior queda de viscosidade cinematica na pectina de alto grau de metoxilacao (AGM), selecionada para as demais etapas. Quando concentrada, sua atividade intensificou-se, promovendo 53,7% de queda de viscosidade cinematica em concentracao de 70 g L -1 apos 72 h. O pH 5.5 e a temperatura de 45 oC foram estimados como otimos de atividade para PL. Por meio do teste espectrofotometrico, foram obtidos valores de atividade de 547.3 U g -1 e 9121.2 nkat g -1 . Apos a precipitacao, foi obtida atividade na concentracao de alcool 30%, com atividade de 680.0 U g -1 e 11333.3 em nkat g -1 . Em cromatografia anionica foi observado um maximo de absorbância correspondente a 0.8 mg mL -1 de concentracao proteica. Analises comparativas da proteina parcialmente purificada com proteina de massa molar padrao apontaram a presenca de proteina com aproximadamente 35 kDa, condizente com a massa molar esperada para a PL, na fracao parcialmente purificada por cromatografia. A atividade enzimatica, pos cromatografia, foi ainda maior com valores de 925.5 U g -1 e de 15424.2 nkat g -1 . Esses resultados confirmaram a presenca da enzima pectina liase no albedo de maracuja e permitiram estabelecer um protocolo para sua purificacao parcial.