Extraction and biological evaluation of external membrane vesicles of Brucella abortus as a candidate for brucellosis vaccine

Abstract

Amaç: Bruselloz, hayvan ve insan sağlığını etkileyen endemik bir zoonotik hastalıktır. Son birkaç on yılda, hastalığı kontrol etmek için daha güvenli Brucella aşıları geliştirmek için çok araştırma yapılmıştır. Dış zar vezikülleri (OMV'ler), insan brusellozunu önlemek için bir alt birim aşı için immünojenik yapılar olarak düşünülmüştür. Bu çalışmanın amacı Brusella abortus'un dış zar veziküllerini bruselloz aşısı için aday olarak değerlendirmektir.Yöntemler: Bu çalışmada Brucella abortus, S99 suşu kullanıldı. Brucella abortusun kitle kültivasyonundan sonra OMV ekstraksiyonu, Ultracentrifugation ve Sodium Dosoxycotinate tarafından gerçekleştirildi. SDS-PAGE yöntemi, fizikokimyasal özellikleri değerlendirmek için protein paternini ve elektron mikroskopisini gözlemlemek için kullanıldı. OMV'deki LOS miktarı da LAL testi ile ölçüldü. Protein konsantrasyonunun belirlenmesinden sonra farelere belirli bir konsantrasyonda enjekte edildi ve antikoru değerlendirmek için kan örnekleri alındı. Son olarak serum izolasyonundan sonra antikor üretimi ELISA yöntemi ile ölçüldü.Bulgular: OMV'de mevcut protein miktarı 0,1 mg/ml idi. OMV'nin boyutu 55 ila 150 nm idi ve SDS-PAGE değerlendirmesinde protein aralığı >25 kDa idi. LAL testindeki LOS değeri yetkili aralıkta rapor edildi. İlk enjeksiyondan sonra IgG düzeylerinde (P=0,001) kontrol grubuna kıyasla ve daha sonraki güçlendiricilerde anlamlı artış gözlendi. En yüksek tepki oranı ikinci güçlendiricide gözlenmiştir.Sonuç: OMV ekstraksiyon sırasında uzamsal şeklini korumaktadır ve Brucella düşüklerine karşı yüksek derecede spesifik antikorların üretimini indükleme potansiyeline sahiptir. Bu nedenle klinik fazları inceledikten sonra aday bir aşı olarak düşünülebilir.