Expression of hepatitis B virus S gene in pichia pastoris and application of the S protein synthesized in immunoassay of HBsAb

Abstract

目的 构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)S蛋白,用以制备乙型肝炎表面抗体(HBsAb)酶免试剂盒.方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列(adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因,并将其插入pPICZB质粒.携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白.表达产物包被聚丙乙烯反应板,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAb. 结果酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达;表达量约占总蛋白的25%～35%.表达产物用ELISA测定效价达1∶25 600;Western blot显示与正常人血清无交叉反应;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测,灵敏度达10 mIu/ml,特异性达100%,重复性及线性良好,与国产商品试剂检测结果一致. 结论毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制。