Abstract
Objective was to experimentally substantiate the possibility to use the finite cell line CHO-K1 for measuring specific activity of cholera toxin and component of the vaccine choleragen-anatoxin in the process of chemical cholera vaccine manufacturing. Materials and methods . The studies involved the finite cell line CHO-K. The registration of results of bio-indication method was performed visually with the help of inverted microscope and photometrically - in colorimetric test for the assessment of metabolic activity of the cells at the wave length of 595 nm. Results and discussion . The proposed method allows for determining the toxin-production activity of Vibrio cholerae 569B strain during submerged cultivation in bioreactor and specific activity of choleragen-anatoxin by anatoxin binding measuring using cell cultures. The results correlate with the data obtained using intradermal Craig’s technique, GM1-ELISA and radial passive immune hemolysis (RPIH). Introduction of cell culture method into practice will provide for significant decrease in the volumes of usage of animals at the stages of manufacturing of chemical bivalent cholera vaccine.
Highlights
Определение активности холерного тесттоксина (ХТ) на линии клеток СНО-К1 проводили по следующей схеме: в первые лунки каждого ряда вносили исследуемые образцы фильтрата бульонной культуры, разведенные 1:10 в питательной среде, по 100 мкл; далее образцы титровали до конца ряда по 100 мкл, получая двукратные разведения с конечным объемом 100 мкл
Подготовку образцов холерогена-анатоксина для определения специфической активности по ЕС проводили по стандартной методике [6]
Результаты определения активности ХТ штамма V. cholerae 569B с помощью культуры клеток имели положительную корреляцию с данными о токсигенности, полученными при использовании методов внутрикожной пробы по Крейгу, радиальным пассивным иммунным гемолизом (РПИГ) и ИФА, при оценке результатов исследования ХТ этими методами коэффициенты корреляции по Пирсону составили 0,8, 0,7, 0,8 соответственно
Summary
Цель – экспериментально обосновать возможность использования перевиваемой линии клеток СНО-К1 для определения специфической активности холерного токсина и компонента вакцины холерогена-анатоксина в процессе производства холерной химической вакцины. В исследованиях использовали перевиваемую линию клеток СНО-К. Учет результатов метода биоиндикации на перевиваемой клеточной линии проводили визуально с помощью инвертированного микроскопа и фотометрически в колориметрическом тесте для оценки метаболической активности клеток при длине волны 595 нм. Предлагаемый метод позволяет определить активность продукции токсина у штамма Vibrio cholerae 569B при глубинном культивировании в биореакторе и специфическую активность холерогена-анатоксина по анатоксиносвязыванию с использованием клеточных культур. Результаты коррелируют с данными, полученными при использовании методов внутрикожной пробы по Крейгу, GM1-ИФА и РПИГ. Введение в практику метода клеточных культур может обес печить существенное сокращение использования животных на этапах производства вакцины холерной бивалентной химической. Ключевые слова: холерная химическая вакцина, культура клеток СНО-К1, холерный токсин, холерогенанатоксин.
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
