Abstract
Exocytosis of myeloperoxidase (MPO) from activated neutrophils in the presence of the anionic polysaccharide heparin was studied. It was determined that the optimal concentration of heparin (0.1 u/ml), at which there is no additional activation of cells (absence of amplification of exocytosis of lysozyme contained in specific and azurophilic granules). It was found that after preincubation of cells with heparin (0.1 u/ml) the exocytosis of MPO from neutrophils activated by various stimulants (fMLP, PMA, plant lectins CABA and PHA-L) increased compared to that under the action of activators alone. In addition, it was shown that heparin in the range of concentrations 0.1-50 u/ml did not affect on the peroxidase activity of the MPO isolated from leukocytes. Thus, the use of heparin at a concentration of 0.1 u/ml avoids the artifact caused by the "loss" of MPO in a result of its binding to neutrophils, and increases the accuracy of the method of registration the degranulation of azurophilic granules of neutrophils based on determination of the concentration or peroxidase activity of MPO in cell supernatants.
Highlights
Проведено исследование экзоцитоза миелопероксидазы (МПО) из активированных нейтрофилов в присутствии анионного полисахарида гепарина
Использование гепарина в концентрации 0,1 ед/мл позволяет избежать артефакта, обусловленного “потерей” МПО в результате её связывания с нейтрофилами, и повысить точность метода регистрации дегрануляции азурофильных гранул нейтрофилов, основанного на определении во внеклеточной среде активности и/или концентрации МПО
Klinke A., Nussbaum C., Kubala L., Friedrichs K., Rudolph T.K., Rudolh V., Paust H.J., Schröder C., Benten D., Lau D. et al (2011) Blood, 117(4), 1350-1358
Summary
Установлено, что после предварительной инкубации клеток с гепарином (0,1 ед/мл) выход МПО из нейтрофилов, активированных различными стимуляторами (fMLP, PMA, растительными лектинами CABA и PHA-L), увеличивался по сравнению c экзоцитозом МПО при действии только активаторов. Использование гепарина в концентрации 0,1 ед/мл позволяет избежать артефакта, обусловленного “потерей” МПО в результате её связывания с нейтрофилами, и повысить точность метода регистрации дегрануляции азурофильных гранул нейтрофилов, основанного на определении концентрации либо пероксидазной активности МПО в супернатантах клеток. В частности, in vitro экзоцитоз МПО можно оценивать по количеству/активности фермента в супернатанте нейтрофилов после инкубации клеток со стимулятором [8]. Однако уровень циркулирующей эластазы (запасённой в тех же гранулах нейтрофилов, что и МПО) в плазме крови данных больных не был увеличен. О-дианизидин (o-DA), цитохалазин b (cyth b), N-формил-метионил-лейцилфенилаланин (fMLP), форбол-12-миристат-13-ацетат (PMA), лиофилизированные бактериальные клетки Micrococcus lysodeikticus, трипановый синий, сорбенты для хроматографии были получены от фирмы “Sigma-Aldrich” (США); гистопак-1077 – от фирмы “Nycomed” (Норвегия); декстран Т70 – от фирмы “Roth” (Германия); 3% раствор H2O2 – от фирмы “Sagmel” (США); субстрат эластазы MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-MCA – от компании “Bachem Holding AG” (Швейцария); растительные лектины: WGA, CABA, PHA-L – от фирмы “Лектинотест” (Украина); гепарин – от фирмы “Белмедпрепараты” (Беларусь); соли, используемые для приготовления буферных растворов, были получены от фирм “Белмедпрепараты” (Беларусь) и “Реахим” (Россия)
Sign-in/Register to view highlights & summary Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
