Excretion Product of Shigella dysenteriae (SdyEP) Induced Cell Death in Early Larval Stage of Zebrafish (Danio rerio): Acridine Orange and Ethidium Bromide (AO/EB) in vivo Staining

Abstract

En el campo de los estudios de toxicidad aguda inducida por agentes bacterianos, las toxinas Shiga resultan relevantes debido a la severidad de las enfermedades extra-intestinales que causan. Numerosos estudios han demostrado que la toxina Shiga induce la apoptosis en diferentes tipos de celulas, sin embargo, este importante proceso ha sido poco estudiado en modelos experimentales in vivo. En este estudio, fueron evaluados los efectos del productos de excrecion de Shigella dysenteriae (PESdy), sobre estadios larvarios de pez cebra (Danio rerio), un modelo animal con muchas ventajas sobre otros modelos experimentales in vivo utilizados tradicionalmente. Tanto la recoleccion de los huevos y larvas de pez cebra, asi como la obtencion del producto de la excrecion, se realizaron de acuerdo a los estandares de laboratorio. Poblaciones larvarias, fueron tratadas con distintas soluciones; pura y diluidas, 10-1, 10-2, 10-3 , 10-4 and 10-5 v/v de PESdy. La muerte celular in vivo, usando naranja de acridina (NA) y bromuro de etidio (BE) fue evaluada. El efecto del PESdy, se expreso como dependiente de la concentracion y del tiempo de exposicion. La poblacion de larvas sobrevivientes, presentaron curvatura troncal en un 10%, en relacion a los controles. La necrosis se puso en evidencia a traves de la opacidad de las larvas despues de 24 h. El uso de NA/BE revelo un patron de distribucion de la fluorescencia en verde y naranja en larvas sobrevivientes al tratamiento. Una gran poblacion de celulas muertas, alrededor de la region anal y caudal, se ponen en evidencia por la presencia de nucleos de naranja en mayor numero que en los controles. Los resultados apoyan la aplicacion de la coloracion NA/BE en modelo experimental de pez cebra, para la evaluacion de la accion toxica de nuevas moleculas y nuevos productos de excrecion bacterial con potencial terapeutico.