Abstract
Poly ADP-ribose Polymerase 1 (PARP1) is an important enzyme that is involved in DNA repair, replication, and transcription. Prospective anticancer drug gossypol inhibits human PARP1, but the mechanism of inhibition remains unknown. It has been shown previously that gossypol interacts with purified BRCA1 C-terminus (BRCT) domain in vitro. However, it remained unclear whether gossypol inhibits PARP1 through the BRCT domain in the context of full-length protein. Here, we report that the BRCT domain within the full-length PARP1 protein is not required for the inhibition of catalytic activity of PARP1 by gossypol. Our results, obtained using a series of PARP1 mutations and H4-dependent pathway of PARP1 activation, also show that none of the zinc fingers or other DNA binding domains of PARP1 are involved in the inhibition of the PARP1 catalytic activity by gossypol. Thus, the likely candidate target(s) for gossypol action are the other domains of PARP1, or the interdomain linkers.
Highlights
МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯPARP1 представляет собой ключевой фермент, участвующий в репарации ДНК, репликации и транскрипции, а ингибиторы PARP1 рассматриваются как перспективные противоопухолевые препараты, действующие как химио- и радиосенсибилизаторы при традиционной терапии злокачественных образований
which is involved in DNA repair
It has been shown that gossypol interacts with purified
Summary
PARP1 представляет собой ключевой фермент, участвующий в репарации ДНК, репликации и транскрипции, а ингибиторы PARP1 рассматриваются как перспективные противоопухолевые препараты, действующие как химио- и радиосенсибилизаторы при традиционной терапии злокачественных образований. В данной работе проводили поиск мишеней действия госсипола, используя серию мутантов PARP1, лишенных домена BRCT или содержащих различные мутации в Zn3-домене. Полученные данные противоречат высказанному ранее предположению, согласно которому, мишенью для действия госсипола является BRCT-домен PARP1. Ключевые слова: PARP1, олапариб, госсипол, BRCT-домен, Zn3-домен, WGR-домен, поли(АДФ-рибозил)ирование. Именно каталитическая область является мишенью действия ингибиторов PARP1. В. Вестерн-блот с моноклональными антителами к поли(АДФ)рибозе, показывающий эффективность авто-модификации PARP1 и его вариантов ΔBRCT и L348D/V350D (Zn3) в отсутствие ингибиторов олапариба и госсипола. Г. Вестерн-блот с моноклональными антителами к поли(АДФ)рибозе, показывающий эффективность авто-модификации PARP1, его варианта ΔBRCT и мутанта по Zn3 в присутствии ингибиторов олапариба и госсипола. Д. Вестерн-блот с моноклональными антителами к поли(АДФ)рибозе, показывающий эффективность авто-модификации PARP1 активированного с помощью ДНК или гистона Н4 в отсутствие и в присутствии ингибиторов олапариба и госсипола. В настоящей работе, с помощью мутантов PARP1, были проверены потенциальные мишени действия госсипола
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have