Abstract
Due to the lack of tumor suppressor function of the fragile histidine triad (FHIT) gene product, sebaceous gland carcinomas can develop. The model of the sebocyte cell line SZ95 was used to identify methylated CpG islands at the 5'-end of the FHIT gene and the decrease of gene expression as well as the increase of double-stranded (ds) DNA breaks were examined. Methylation, immunofluorescence analysis, promotor sequencing and treatment of SZ95 cells with 5‑azacytidine/trichostatinA (TSA). The cultivation was accompanied by an increasing methylation of the CpG islands, adecrease of the FHIT gene expression and an accumulation of ds-DNA breaks. Treatment with 5‑azacytidine/TSA showed adecrease in DNA methylation and are-expression of FHIT transcripts. Epigenetic changes in the cellular genome are caused by in vitro cell culture. Consequently, apositive selection of sebocytes with an epigenetically inactivated FHIT locus occurs.
Highlights
Due to the lack of tumor suppressor function of the fragile histidine triad (FHIT) gene product, sebaceous gland carcinomas can develop
The cultivation was accompanied by an increasing methylation of the CpG islands
trichostatin A (TSA) showed a decrease in DNA methylation
Summary
Epigenetische Veränderungen am Promotor des fragilen Histidin-Trias(FHIT)-Gens in menschlichen Sebozyten unter dem Einfluss der In-vitro-Kultur. Abb. 5 wird klar, dass sich durch die Behandlung der SZ95-Zellen mit der demethylierenden Substanz 5-Azacytidin sowie in Kombination mit Trichostatin A bereits methylierte DNA wieder demethylieren ließ: Ein Teil der methylierten DNA, dokumentiert durch die Signalstärke der 191 bp-Bande (M), wurde durch die Behandlung in die unmethylierte Form umgewandelt, was deutlich wird anhand der zunehmenden Intensität der Bande von 247 bp (U) in Relation zum kleineren methylierungsspezifischen Produkt (M). Zum einen hat diese Analyse gezeigt, dass der den Promotor des FHIT-Gens inaktivierende Methylierungsmechanismus, der in TDK-Zellen von MRTES-Patienten bereits zuvor von uns beschrieben worden war, sich in der Sebozytenpopulation im Zuge der prolongierten In-vitro-Kultur bestätigen und durchsetzen konnte. Unsere Daten bestätigen in dem hier präsentierten In-vitro-Modell einer Sebozytenlinie, dass die Abschaltung des FHIT-Gens in Übereinstimmung mit Untersuchungen an Knockout-Mäusen [6] ein sehr frühes und spezifisches Ereignis in der Tumorgenese von TDK ist.
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