Abstract
We report herein improved version of the synthesis of hapten based on cholecalciferol and its active metabolite 25-hydroxycholecalcalferol. The methodology of obtaining high-molecular immunogenic conjugates of vitamin D3 derivatives with bovine serum albumin and horseradish peroxidase conjugates for direct ELISA was optimized. Immunisation of rabbits was carried out and polyclonal antibodies to 25-hydroxycholecalceferol were obtained and tested in an enzyme-linked immunosorbent assay. To improve the accuracy of the method, the sample preparation procedure was optimized, including the release of vitamin D3 and its active metabolites from complexes with vitamin D-binding protein.
Highlights
BIOORGANIC CHEMISTRYОписан улучшенный вариант синтеза гаптена на основе холекальциферола и его активного метаболита 25-гидроксихолекальцеферола
В печени под действием CYP2R1 или CYP27A1 образуется 25-гидроксихолекальцеферол, который затем гидроксилируется под действием CYP27B1 до 1,25-дигидроксихолекальцеферола преимущественно в почках [2]
Синтезированы активированные производные витамина D3 и его активного метаболита 25-гидроксивитамина D3 для проведения конъюгации с белковыми молекулами
Summary
Описан улучшенный вариант синтеза гаптена на основе холекальциферола и его активного метаболита 25-гидроксихолекальцеферола. Оптимизирована методика получения высокомолекулярных иммуногенных конъюгатов производных витамина D3 с бычьим сывороточным альбумином, а также конъюгатов с пероксидазой хрена для прямого ИФА. Выделены поликлональные антитела к 25-гидроксихолекальцеферолу, которые испытаны в иммуноферментном анализе. Для повышения точности метода оптимизирован процесс пробоподготовки, включающий высвобождение витамина D3 и его активных метаболитов из комплексов с витамин D-связывающим белком. Ключевые слова: 25-гидроксихолекальцеферол, витамин D3, биоконъюгация, иммуноферментный анализ, витамин D-связывающий белок. Иммуноферментный анализ метаболитов витамина D3 / А.
Sign-in/Register to view highlights & summary Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callMore From: Proceedings of the National Academy of Sciences of Belarus, Chemical Series
Disclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
