Effects of stromal cells on sentitivity to imatinib in Sup-B15 Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia cells

Abstract

目的探讨基质细胞OP9能否影响Ph+急性淋巴细胞白血病细胞株Sup-B15细胞对伊马替尼的敏感性以及作用机制。方法实验分为Sup-B15细胞组及基质细胞OP9与Sup-B15共培养组（即Sup-B15/OP9组）。采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率；流式细胞术检测Annexin V/7-AAD标记的细胞凋亡率、CD34+CD38−细胞比例；荧光定量PCR检测细胞ALDH1、CD144、β-catenin mRNA水平；Western blot法检测细胞CD133、CD144、β-catenin蛋白表达水平；免疫共沉淀方法检测结合于CD144的β-catenin水平。结果10~45 µmol/L伊马替尼对Sup-B15、Sup-B15/OP9细胞均有增殖抑制作用，其IC50值分别为26.3和35.8 µmol/L，两组差异有统计学意义（P<0.05）。30 µmol/L伊马替尼作用于Sup-B15、Sup-B15/OP9细胞24 h，细胞总凋亡率分别为（14.24±2.11）%和（3.45±0.68）%，两组差异有统计学意义（P<0.05）。与Sup-B15组相比，Sup-B15/OP9组CD34+CD38−细胞比例增高[（3.42±0.28）%对（2.16±0.15）%，P<0.05]，ALDH1 mRNA水平增高（0.097±0.012对0.046±0.010，P<0.05），CD133蛋白表达水平升高；CD144 mRNA水平增高（0.103±0.015对0.010±0.003，P<0.05），CD144蛋白表达水平亦明显增高；β-catenin mRNA水平无明显变化（P>0.05），其蛋白总量明显上升，转位到细胞核的β-catenin蛋白明显增加，结合于CD144的β-catenin蛋白增加。结论与OP9细胞共培养后，Sup-B15细胞对伊马替尼敏感性下降，该作用可能与上调CD144表达、稳定CD144 /β-catenin信号通路、增加β-catenin核转位有关。