Effects of 17-DMAG on non-small cell lung cancer cell lines A549 and H1975 being resistant to EGFR-TKI

Abstract

背景与目的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, sEGFR-TKI）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者的临床治疗中产生的原发性及获得性耐药限制了其临床应用，需要探索新的策略或方法来克服这个问题。最近有文献报道认为热休克蛋白90（heat shock protein 90, HSP90）抑制剂能从多种途径和环节发挥抗肿瘤作用，这为解决NSCLC对EGFR-TKI的耐药提供了新的思路。本研究通过观察HSP90抑制剂17-DMAG对EGFR-TKI分别原发性及获得性耐药的NSCLC细胞株A549和H1975的作用，旨在探讨它对细胞增殖、凋亡与EGFR蛋白表达的影响及其可能的机制。方法以不同浓度的17-DMAG分别作用于A549和H1975细胞株24 h、48 h、72 h，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖；作用48 h后，应用流式细胞术PI单染法检测细胞凋亡，并应用Western blot检测细胞HSP90及EGFR蛋白表达水平。结果17-DMAG在不同药物浓度和作用时间对A549和H1975细胞的增殖抑制率差异均有统计学意义（P＜0.01），且呈时间和剂量依赖性；两种细胞不同药物浓度组和空白对照组之间的凋亡率差异均有统计学意义（P＜0.01），且呈剂量依赖性；17-DMAG作用48 h后，A549细胞的EGFR/GADPH和HSP90/GADPH及H1975细胞的HSP90/GADPH在不同药物浓度组和空白对照组之间的灰度比值差异均无统计学意义（P＞0.05），而H1975细胞的EGFR/GADPH在不同药物浓度组和空白对照组之间的灰度比值差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论17-DMAG对NSCLC细胞株A549和H1975均具有抑制增殖及促进凋亡作用，且它能降低突变型EGFR的蛋白表达水平，而对野生型EGFR的蛋白表达无明显影响。本研究为EGFR-TKI耐药的非小细胞肺癌提供了新的治疗策略。