Effect of TSC2 gene expression downregulation by lentivirus induced RNA interference on U937 cell line and its mechanism

Abstract

目的研究下调TSC2基因表达对白血病U937细胞系的生物学作用及其对mTOR通路活性的影响。方法选择TSC2高表达的U937细胞系，通过慢病毒介导的RNA干扰技术下调TSC2基因表达；采用CCK-8比色法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测其对细胞增殖、分化和凋亡的影响；采用Western blot法和实时荧光定量PCR（RQ-PCR）法检测TSC2表达下调对mTOR通路蛋白表达及活性的影响。结果TSC2基因表达降低能够促进U937细胞的增殖和集落形成（P<0.05）；能够使U937细胞G1期[（52.53±3.75）%对（75.10±4.33）%，t=6.829，P=0.002]比例明显降低，G2/M期[（22.43±1.00）%对（15.47±1.20）%，t=−5.581，P=0.019]、S期[（25.03±4.34）%对（14.33±0.91）%，t=−5.413，P=0.013]比例升高；对细胞分化和细胞凋亡没有明显影响（P>0.05）。TSC2基因表达下调后，mTOR活性升高，磷酸化的4EBP1和S6K1蛋白活性升高，而AKT蛋白活性没有明显变化；与细胞增殖相关的基因cyclin D1、c-myc表达升高，PTEN基因表达升高，P27KIP基因和凋亡相关基因BCL-XL的表达没有明显的改变。结论TSC2基因表达下调可以通过调节mTOR通路活性促进白血病细胞的增殖。