Effect of shRNA-mediated silencing of BDNF gene on VEGF expression of RPMI8226 cells

Abstract

目的研究脑源性神经营养因子（BDNF）对多发性骨髓瘤（MM）细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用，初步探讨BDNF与MM血管新生的关系。方法设计和构建针对人BDNF基因的siRNA表达载体，用脂质体Lipofectamine™2000介导转染，将空载体质粒pGenesil-1和重组质粒pGenesil-shRNA-BDNF分别转染MM细胞株RPMI8226细胞（分别命名为P0组、P1组）。采用RT-PCR法和Western-blot法鉴定干扰后BDNF的表达；MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖、凋亡；RT-PCR法和ELISA法检测干扰BDNF对细胞表达VEGF的影响。结果①成功构建了针对BDNF的siRNA真核表达载体。与未转染组（Pn组）及P0组相比，P1组BDNF mRNA水平及蛋白水平显著下调（P值均<0.05）；②P1组细胞的增殖活性（0.42±0.06）显著低于Pn组（0.56±0.06）和P0组（0.50±0.04）（P值均<0.05）；③P1组细胞的早期凋亡率[（53.84±9.95）%]明显高于Pn组[（5.23±2.46）%]和P0组[（9.10±3.46）%]（P值均<0.01）；④P1组细胞VEGF121、VEGF145和VEGF165 mRNA表达水平分别为Pn组的（0.62±0.07）、（0.47±0.09）和（0.57±0.02）倍（P值均<0.05）。⑤P1组细胞VEGF的分泌水平分别为Pn组的（0.36±0.05）倍和P0组的（0.44±0.06）倍（P值均<0.05）。结论BDNF基因沉默可促进RPMI8226细胞凋亡并抑制其增殖，下调RPMI8226细胞VEGF的表达，BDNF可能通过调控MM细胞VEGF的表达而参与MM血管新生的病理过程。