Effect of growth differentiation factor 5 on connexin 43 expression during chondrogenic differentiation of mouse bone marrow stemal cells in vitro

Abstract

目的 探讨生长分化因子-5(GDF-5)在小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向软骨分化过程中对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 体外培养小鼠BMSCs,贴壁细胞传代,取第3代细胞,加入地塞米松、VitC、胰岛素和GDF-5诱导培养,72 h后免疫细胞化学和阿尔辛蓝染色分别检测软骨细胞特异性Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;在诱导24、48和72 h后进行如下检测:MTT法测定GDF-5对小鼠BMSCs增殖的影响;RT-PCR、Western blotting和免疫细胞化学法检测GDF-5对Cx43蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示不同时间GDF-5对小鼠BMSCs的增殖无影响;RT-PCR、Western blotting和免疫细胞化学结果表明诱导后不同时间均有Cx43 mRNA和蛋白的表达;诱导72 h免疫细胞化学显示有Ⅱ型胶原蛋白的表达,阿尔辛蓝染色阳性,有蛋白多糖基质的分泌.结论 GDF-5可以通过上调缝隙连接蛋白Cx43的表达来促进小鼠BMSCs向软骨方向的分化。