Effect of endothelial cell-targeted soluble Notch ligand hD1R protein on the proliferation of acute myeloid leukemia cells

Abstract

目的探讨内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对急性髓系白血病（AML）细胞增殖的影响。方法以24例初诊AML患者为研究对象（AML组），以9例白细胞或血小板计数略低，但骨髓象未见异常者为对照（对照组），采用实时定量PCR法检测其骨髓CD34+细胞Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Hes1 mRNA水平；诱导、表达及纯化内皮细胞靶向的可溶性hD1R融合蛋白。以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为支持细胞，联合应用重组人干细胞因子（SCF）、TPO、Flt-3配体(FL)、IL-6、IL-3五种人源性生长因子（5GF）及hD1R蛋白为共培养条件，分别将AML组和对照组的CD34+细胞进行体外培养，分析在hD1R组、PBS组（PBS代替hD1R）、5GF组、γ-分泌酶抑制剂（GSI）组（hD1R+GSI）4种不同培养条件下CD34+细胞增殖、凋亡情况。并用实时定量PCR法检测培养后的AML组和对照组细胞内Hes1、Bcl-2 mRNA表达。结果①与对照组相比，AML组细胞Notch1、Hes1 mRNA水平明显下降，Notch4 mRNA水平明显升高（P值均<0.05）。②在不同体外培养条件下，hD1R组、PBS组AML细胞总数分别为（0.74±0.13）×105、（2.16±0.21）×105，差异有统计学意义（t=5.70，P<0.01）。③hD1R组培养条件下，AML组、对照组细胞凋亡率分别为（18.48±2.51）%、（3.19±0.58）%，差异有统计学意义（t=5.94，P<0.01）。AML组不同培养条件下细胞凋亡率比较，hD1R组、5GF组较PBS组明显升高（P值均<0.05），GSI组较hD1R组明显降低（P<0.05）。④hD1R蛋白明显上调AML细胞Hes1表达（P<0.01），下调抗凋亡基因Bcl-2表达（P<0.05）。结论hD1R蛋白可有效激活AML细胞内Notch信号，下调Bcl-2基因，抑制AML细胞增殖，促进细胞凋亡。