Abstract
Dada la dificultad en diferenciar las especies de Rhodococcus por pruebas bioquímicas, se desarrolló una prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), seguida de un ensayo de Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción (PCR-RFLP) para la diferenciación de las mismas. R. equi, R. rhodnii y otras bacterias fueron cultivadas en agar sangre y BHI a 37 y 26 °C. El ADN bacteriano fue extraído y amplificado con los iniciadores descritos por Hypsa y Dale. Los productos de amplificación fueron sometidos a digestión con diversas enzimas de restricción y los patrones de restricción obtenidos fueron confirmados mediante análisis in silico. Se obtuvo el fragmento de amplificación esperado de 1300 pb en todas las bacterias analizadas. Se pudo diferenciar R. equi de R. rhodnii con las endonucleasas PstI y HindIII y con respecto a otras bacterias con PstI, HindIII, SstI, BamHI y EcoRI. Los patrones de restricción obtenidos fueron confirmados mediante análisis in silico. La prueba PCR-RFLP constituye una alternativa para la diferenciación entre especies de Rhodococcus tales como R. equi y R. rhodnii.
Highlights
Considering the difficulty to differentiate the species of Rhodococcus by biochemical tests, a Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) has been developed to distinguish the species of the genus Rhodococcus
Dentro del género Rhodococcus también se encuentran bacterias simbiontes de insectos, tales como Rhodococcus rhodnii (5) y Rhodococcus triatomae (6), microorganismos que han sido encontrados en el intestino de los insectos triatominos Rhodnius prolixus y Triatoma spp., vectores transmisores de Trypanosoma cruzi, el agente causal de la enfermedad de Chagas
Esta prueba puede ser utilizada en la búsqueda, identificación y diferenciación de bacterias simbiontes en otras especies de triatominos
Summary
Considering the difficulty to differentiate the species of Rhodococcus by biochemical tests, a Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) has been developed to distinguish the species of the genus Rhodococcus. Dentro del género Rhodococcus también se encuentran bacterias simbiontes de insectos, tales como Rhodococcus rhodnii (5) y Rhodococcus triatomae (6), microorganismos que han sido encontrados en el intestino de los insectos triatominos Rhodnius prolixus y Triatoma spp., vectores transmisores de Trypanosoma cruzi, el agente causal de la enfermedad de Chagas. En este trabajo se desarrolló una prueba de PCR, seguida de un ensayo de Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción (PCR-RFLP), para diferenciar especies de Rhodococcus tomando como ejemplo las especies R. equi y R.rhodnii.
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