Development of Food-Raw-Material-Based Nutrient Media for Submerged Cultivation of Cholera Vibrio Strains

A K Nikiforov,M V Antonycheva,K I Kholmatov,M N Kireev,S A Eremin,I M Zhulidov,N I Vakhrushina,Yu A Aleshina,O A Volokh,N G Avdeeva

doi:10.21055/0370-1069-2015-1-85-88

Abstract

Carried out has been comparative assessment between the performances of liquid nutrient pancreatic fibrin overcook-based and bakery yeast autolyzate-based media and conventionally used in manufacturing of cholera vaccine media for submerged cultivation of Vibrio cholerae 569B and V. cholerae M-41 strains. Results of investigation of media quality biological predictors (morphological and biochemical property stability, efficacy of biomass and protective antigen accumulation), which are fibrin hydrolyzate and bakery yeast autolyzate-based, suggest the possibility of using them for the production of cholera vaccine. Deployment of inedible raw material-based media in manufacturing of cholera vaccine is a prospective technology in view of reduction of medical-prophylactic preparation costs. Moreover it allows for solving the problem of protein waste-product disposal, which is generated in the process of anti-rabies immunoglobulin manufacturing, thus decreasing ecological impact on the environment.

Highlights

Проведено сравнение эффективности жидких питательных сред на основе панкреатического перевара фибрина и автолизата пекарских дрожжей и сред, традиционно используемых в производстве холерной вакцины для глубинного культивирования штаммов Vibrio cholerae 569 В и V. cholerae М-41
Deployment of inedible raw material-based media in manufacturing of cholera vaccine is a prospective technology in view of reduction of medical-prophylactic preparation costs
It allows for solving the problem of protein waste-product disposal, which is generated in the process of anti-rabies immunoglobulin manufacturing, decreasing ecological impact on the environment

Summary

Материалы и методы

В работе использованы штаммы холерных вибрионов Vibrio cholerae O1 M-41 и V. cholerae 569 В, полученные из Госколлекциии патогенных бактерий РосНИПЧИ «Микроб». В качестве контрольных питательных сред (ПС) использованы жидкие среды лабораторного изготовления (РосНИПЧИ «Микроб») с рН (7,7±0,1): среда на основе гидролизата по Хоттингеру (ГХ) и среда на основе панкреатического гидролизата казеина (ГК), соответствующие требованиям МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» и МУ 3.3.2.2124-06 «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза». Эффективность экспериментальных питательных сред при глубинном культивировании штаммов V. cholerae определяли как по выходу микробных клеток с 1 мл питательной среды, учитывая концентрацию микробных клеток в осадке после центрифугирования культуральной среды, так и по количеству продуцируемого вибрионами О-антигена (О‐АГ) и холерного токсина (ХТ) на 1 мл среды. Для количественной оценки О-АГ в центрифугате бульонной культуры V. cholerae M-41 применяли регламентированный тест – реакцию диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле по Оухтерлони со специфическими агглютинирующими сыворотками производства РосНИПЧИ «Микроб» и иммуноферментный анализ (ИФА) с конъюгатом. Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с использованием t‐критерия Стъюдента

Результаты и обсуждение

Продукция АГ