Development and primary application of a real-time quantitative polymerase chain reaction for the detection of human breast cancer related novel gene-kallikrein gene 6 expression

Abstract

目的 建立人乳腺癌相关基因组织型激肽释放酶基因家族成员Kallikrein6 (klk6)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法,以检测正常乳腺和乳腺癌组织中klk6基因表达水平.方法以GAPDH作参照,用SYBR Green I荧光定量技术,建立检测klk6 mRNA的FQ-PCR方法;并检测32份正常乳腺和乳腺癌组织标本的循环阈值(Ct),然后,通过REST软件分析klk6 mRNA的表达水平.结果 FQ-PCR方法对GAPDH和klk6 mRNA的扩增效率分别为0.90和0.95,批内变异系数(CV)分别为1.0%～2.1%和0.8%～1.2%,批间CV分别为3.2%和3.9%.正常乳腺和乳腺癌组织的klk6对GAPDH的相对表达量分别为0.017±0.009和0.040±0.017.用REST软件分析,提示乳腺癌组织klk6表达水平上调.结论建立的klk6 mRNA FQ-PCR检测方法简便,特异,重复性好,可信度高,可用于klk6基因表达水平与肿瘤相关性研究。