Abstract
Balb/С mice were immunized with recombinant Ebola virus glycoprotein. Following the selection, screening, and cloning of murine hybridomas, we obtained five genetically stable clones of monoclonal antibodies GPE118 (IgG), GPE274 (IgM), GPE325 (IgM), GPE463 (IgM), and GPE534 (IgG). These antibodies were isolated and purified from the ascitic fluid of Balb/С mice using Protein G affinity chromatography (for IgG) and euglobulin precipitation (for IgM). To select at least three candidate antibodies for testing in biological assays as components of an antibody cocktail for the prophylaxis and treatment of hemorrhagic fever, we carried out an immunochemical analysis of the epitope specificity of the isolated antibodies. Based on the data of immunoblotting and sandwich ELISA, it became evident that the epitope recognized by GPE 534 differs from the epitopes recognized by the monoclonal antibodies GPE 118 and GPE 325. The last two antibodies also have different epitope specificity: it follows from the immunoblotting data and from the data on the binding of these antibodies with the intact and oxidized (partly deglycosylated) recombinant glycoprotein. For the biological activity studies and the development of recombinant counterparts, we selected three candidate high-affinity monoclonal antibodies GPE 534, GPE 118, and GPE 325.
Highlights
Материалы и методыДля получения МоАт использовали очищенный рекомбинантный гликопротеин вирусной оболочки
Для иммунизации мышей линии BALB/c использовали конъюгат EBOV rGPdTM и белка теплового шока HSP65 из M. tuberculosis, который получали, как описано в работе [13].
Тестирование супернатантов гибридом проводили методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием биотинилированного EBOV rGPdTM.
Summary
Для получения МоАт использовали очищенный рекомбинантный гликопротеин вирусной оболочки Для иммунизации мышей линии BALB/c использовали конъюгат EBOV rGPdTM и белка теплового шока HSP65 из M. tuberculosis, который получали, как описано в работе [13]. Тестирование супернатантов гибридом проводили методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием биотинилированного EBOV rGPdTM. По результатам непрямого ИФА с использованием биотинилированного EBOV rGPdTM были отобраны пять антител для дальнейшего иммунохимического анализа, из которых два МоАт принадлежали к IgG-, а три МоАт к IgMподклассу. Для решения данной задачи было решено провести сравнительный анализ полученных МоАт методами иммуноблоттинга, непрямого ИФА с иммобилизованными окисленным и интактным EBOV rGPdTM, а также с помощью сэндвич-ИФА. Результаты титрования биотинилированного EBOV rGPdTM в непрямом ИФА (приведены значения OD450) с иммобилизованными антителами. Результаты титрования МоАт в непрямом ИФА (приведены значения OD450) с иммобилизованными окисленным и интактным EBOV rGPdTM
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
