DETERMINACIÓN POR PCR EN TIEMPO REAL DE Escherichia coli EN MUESTRAS DE COMIDA RÁPIDA

Abstract

En la presente investigación se analizaron muestras de alimentos expendidos en las calles aledañas a la Universidad Politécnica Salesiana, Sede El Girón y se determinó la presencia de Escherichia coli mediante la técnica de PCR en Tiempo Real con una comprobación microbiológica en tres establecimientos de comida rápida más concurridos por la comunidad de estudiantes de las Universidades cercanas. Para lograr un análisis estadístico confiable, se analizaron alrededor de 15 muestras de alimentos por cada uno de los establecimientos con diferentes productos. Se elaboró un protocolo para la cuantificación de la muestras, utilizando una curva estándar para E. coli. Los análisis microbiológicos se realizaron por un método estándar convencional por cultivo en medios específicos (EMB, Mckonkey) y la PCR en tiempo real con un diseño de primers específicos y el kit de LC FS DNA MasterˆPLUS HY-Pb, 96 react. (Roche Diagnostics). Con la PCR se aisló E. coli en el 100 % de las muestras, mientras que por el método convencional se detectó tan solo el 53,36 %. La prueba de χ2 mostró significancia estadística entre ambas técnicas. El método molecular reveló un total de 100 % de casos positivos en los alimentos expendidos en los tres establecimientos de comida rápida que presentaron mayor contaminación por E.coli, mientras que a través del método convencional se obtuvieron en: hamburguesas 40 %, shawarmas 66.7 % y pinchos 53.3 % de casos positivos respectivamente. Se observó además diferencias con respecto al tiempo empleado por cada una de las técnicas: la PCR permite obtener resultados mucho más sensibles, rápidos y específicos, en comparación con el método convencional de cultivos celulares. Mediante la curva estándar se logró cuantificar la cantidad de ADN en cada muestra.