Abstract
There is a very strong documented correlation between the appearance of cancer cells in blood and occurrence of metastasis in gastrointestinal cancer. To determine MUC1, CK19, CK20 and CEA mRNA expression in bone marrow of patients with gallbladder cancer and evaluate its clinical significance. Sixty eight samples were analyzed, 38 bone marrow samples of gallbladder cancer patients, 20 healthy donors, and 10 frozen samples of gallbladder cancer. Nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction (nested RT-PCR) was used to analyze mRNA expression. All frozen tumors were positive for CEA, CK19, and MUC1 mRNA and 70% were positive for CK20. Seventeen of 20 donor samples were positive for MUC1 and only one sample from donors was positive for both CK20 and CK19 mRNA. Among the 38 blood and bone marrow samples of gallbladder cancer patients, the expression of MUC1, CK19, CK20, and CEA, mRNA was 60.5% (23/38), 31.6% (12/38), 7.9% (3/38), and 7.9% (3/38), respectively. Disregarding the MUC1 results. 37% (14/38), 13% (5/38) and 5% (2/38) were positive for one, two and three markers respectively. Not significant differences were found in survival with a follow up to 12 months. Our results indicate that the molecular detection of tumor cells in bone marrow in patients with gallbladder carcinoma is technically possible, being CEA, CK19 and CK20 gene expression the best markers. The MUC1 gene expression marker was highly unspecific and it should not been considered. The detection of bone marrow micrometastasis might be helpful in prognosis and the selection of clinical treatment but a larger series with a longer follow-up should be studied.
Highlights
El cáncer de vesícula biliar es muy común en Chile, siendo la primera causa de muerte por cáncer en mujeres sobre los 40 años
A pesar de los avances del tratamiento del cáncer gastrointestinal el pronóstico de éstos y de los carcinomas avanzados de vesícula biliar, en particular, es aún muy malo[1,2]
En este sentido varias reacciones de RT-PCR han sido descritas para el antígeno carcino-embrionario (CEA), la citoqueratina (CK19) y la citoqueratina (CK20) para la detección de células circulantes de cáncer colorrectal y cáncer gástrico[3,7]; mamaglobina para los cánceres de mama[8,9], MAGEs para melanoma[10], mutación de K-ras para cánceres pancreáticos y de colón[11,12], antígeno prostático específico (PSA) para cánceres de mama y de próstata[13,14]
Summary
Los tejidos de tumores vesiculares fueron también obtenidos y almacenados en tubos con gel criopreservante (Jung, Alemania) a una temperatura de -75°C antes de proceder a la extracción de ARN. Para asegurar la ausencia de contaminación de ADN en las muestras de ARN fueron tratadas con RQ1 DNasa (Promega, USA) por 30 minutos a 37°C. Los aspirados de médula ósea de los pacientes y las muestras de los donantes fueron procesados antes de 4 horas desde el momento de su obtención. Los leucocitos fueron aislados por una gradiente de centrifugación usando Linphoprep (Nycomed Pharma Norway) de acuerdo al protocolo sugerido por los fabricantes y luego fueron almacenados en tiocianato de guanidina a una temperatura de -75°C hasta el momento de la extracción del ARN. Para verificar la integridad y pureza del ARN se realizó un PCR simple para el gen DRB1, que permite detectar la presencia de ADN no proveniente de la reacción de transcripción reversa. Listado de los iniciadores tamaño de los productos y las condiciones de PCR usados en este estudio
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