Abstract
Aim. The development of the hepatitis E virus (HEV) genotype 1 full-size ORF3 recombinant polypeptide. Materials and methods. Escherichia coli strains, plasmid vectors, serological and clinical samples, ELISA reagent kits, molecular biological, bioinformatic, biotechnological, biochemical and serological methods. Results. HEV genotype 1 RNA had been isolated from clinical samples collected in Kyrgyzstan. DNA copy of subgenomic virus RNA had been cloned and used for further development of E.coli strains producing full-size recombinant protein ORF3 fused to E.coli beta-galactosidase. Codons optimization method was used in aim to increase expression level of recombinant protein. Recombinant protein ORF3 had been isolated from the inclusion bodies of the E.coli biomass and purified by size exclusion chromatography. Antigenic specificity of recombinant polypeptide had been confirmed by enzyme-linked immunosorbent assay and Western blotting with the specific sera. Conclusion. HEVgenotype 1 ORF3 recombinant antigen had been designed, and it’s applicability in diagnostic tests had been experimentally confirmed.
Highlights
Khudyakov Y.E., Khudyakova N .S., Jue D.L. et al Comparative characterization of anti genic epitopes in the immunodominant region o f the protein encoded by open reading frame 3 in burmese and mexican strains o f hepatitis E virus
Разработан рекомбинантный антиген ORF2 вируса ге патита Е (ВГЕ) 1 генотипа и экспериментально показана возможность его применения вдиагностических тестах
Summary
Праймеры и пробы для ПЦР и секвенирования синтезировали в Институте биоорганической химии им. акад. Для клонирования фрагментов субгеномной РНК использовали 5 полученных образцов кДНК и 5 пар специ фических праймеров, рассчитанных на основе последовательности генома вируса ВГЕ 1 генотипа (N C B IАВ369689), выбранного в качестве консенсуса поданным биоинформационного анализа. Белковый состав лизатов клонов рекомбинантного штамма-продуцента E.coli PLT90 исследовали методами электрофореза в SDS-полиакриламидном геле и вестерн-блоттинга с пулом образцов сывороток крови, содержащих IgG к ВГЕ 2 представлены результаты электрофоретического анализа белкового состава лизатов биомасс рекомбинантных штаммов E.coli до и после оптимизации кодонов и результаты исследования методом вестернблоттинга взаимодействия рекомбинантного белка в составе лизатов с пулом сывороток больных ГЕ. 1,2 — лизаты культур клонов E.coli POP2136, экспресси рующих рекомбинантный полипептид ORF3 после (1) и до (2) оптимизации кодонов; 3 —ранее полученный рекомби нантный полипептид ORF3 ВГЕ штамма Бирма (92 — 123 а.о.); 4 — лизат клеток POP2136, трансформированных плазмидой рЕХ1 без вставки; 5 — маркеры молекулярных сывороток в 11 — 13 фракци ях Молекулярная масса по лученного рекомбинантного масс (193, 112, 64, 30, 26, 12,8, 6,5 кД)
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callMore From: Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology
Disclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
