Cultural Antigen in the Technology for Anti-Rabies Immunoglobulin Obtainment from Equine Blood Serum

S V Generalov,E G Abramova,A V Komissarov,O A Lobovikova,M N Kireev,R A Svintsov,A K Nikiforov,Zh V Matveeva,I M Zhulidov

doi:10.21055/0370-1069-2012-4-65-68

Abstract

week after immunization (specific activity is identified using neutralization reaction on the model of white mice and dot-blot immunoassay). This level of activity is sufficient for the fractioning of immune serum and extraction of anti-rabies immunoglobulin. Physicochemical and biological properties of the anti-rabies immunoglobulin, obtained with the help of cultural antigen technique, meet the requirements stated in the normative documentation on anti-rabies immunoglobulins extracted from equine blood serum. Specific activity level of experimental batches of anti-rabies immunoglobulin, obtained with the help of cultural technologies, corresponds to 242 and 214 IU/ml.

Highlights

Показана возможность применения культурального рабического антигена, полученного на основе фиксированного вируса бешенства штамма Москва 3253, для иммунизации лошадей – продуцентов антирабической сыворотки
Displayed is the possibility of application of cultural rabies antigen, derived from fixed rabies virus of the strain “Moscow 3253”, for immunization of horses – producers of anti-rabies serum
Determined is the fact that specific antibody titers are higher than 1:500 toward the 11th week after immunization. This level of activity is sufficient for the fractioning of immune serum and extraction of anti-rabies immunoglobulin

Summary

Материалы и методы

Фиксированный вирус бешенства (штамм Москва 3253) выращивали на перевиваемой клеточной линии Vero суспензионным и псевдосуспензионным методами с использованием биореактора BioG-M Plus («BioTron», Корея) вместимостью 5 л. Для культивирования клеток и вируса псевдосуспензионным методом использовали микроносители Cytodex 3 (Sigma). Для культивирования клеток Vero использовали среду Игла МЕМ с 10 % содержанием сыворотки крупного рогатого скота («Биолот», Россия); вируса бешенства – среду 199 («Биолот», Россия) с содержанием человеческого сывороточного альбумина 0,1 % и антибиотиков (пенициллин 100 ЕД/мл; стрептомицин 0,1 мг/мл). Полученный концентрат использовали для иммунизации лошадей – продуцентов антирабической сыворотки. Взятие крови для получения АИГ осуществляли через 10 дней после последней иммунизации. Для получения высокоочищенного раствора иммуноглобулина проводили предварительную фильтрацию через ацетатцеллюлозные фильтры с диаметром пор 0,8 и 0,45 мкм, далее с целью улучшения показателей цветности и прозрачности осуществляли фильтрацию через глубинные фильтры Zeta Plus («CUNO», Франция). Стерилизующую фильтрацию раствора иммуноглобулина проводили с применением ацетатцеллюлозных мембран с диаметром пор 0,22 мкм. Статистический анализ полученных результатов проводили по общепринятым методам [1]

Результаты и обсуждение

Электрофоретическая чистота*