CRISPR‐Cas

Abstract

ZusammenfassungCRISPR‐Cas ist ein adaptives und vererbbares Immunsystem, mit dem sich Prokaryoten gegen invasive genetische Elemente wie Viren wehren. Es eignet sich aber auch hervorragend zur Manipulation von Genomen. Die Nuklease Cas9 wird durch eine Leit‐RNA zu einem bestimmten DNA‐Abschnitt geführt und fügt dort einen Doppelstrangbruch ein. Dieser wird durch ein zelleigenes Reparatursystem verknüpft, wobei Fehler entstehen, die das Gen zerstören. In unserem Experiment wird ein Knockout des stabil in eine menschliche Glioblastomzelllinie eingefügten, viralen Thymidinsynthase‐Gens durchgeführt. Da letzteres mit dem Gen des Grün Fluoreszierenden Proteins fusioniert ist, lässt sich der Erfolg des Experiments an der abnehmenden grünen Fluoreszenz verfolgen. Gleichzeitig fluoreszieren Zellen, die Cas9 produzieren, orange‐rot, da Cas9 immer zusammen mit dem Orange Fluoreszierenden Protein produziert wird. Aus grün wird rot