Abstract
The expression of SERPINA1 gene in prostate (DU145, PC-3 and LNCaP) and liver (HepG2) tumor cell lines was studied. Alpha1-antitrypsin (AAT) level in the whole cell extracts, secretomes, subcellular fractions and SERPINA1 mRNA level in the corresponding cells were detected. Discordance between expression at these two levels in PC-3 and LNCaP lines was revealed. A new 37 kDa AAT N-terminus truncated isoform was detected in the nuclear extracts of some prostate tumor cell lines. The mechanism of 37 kDa AAT isoform intracellular retention was proposed. Two polyadenylation sites in the 3'-untranslated region of SERPINA1 transcripts were identified. A SERPINA1 gene 3'-untranslated region influence on AAT translation has been discussed.
Highlights
При опухолевой прогрессии могут происходить изменения функционального состояния ААТ: снижение его антипротеолитической активности [5] и изменение типа гликозилирования [6]
Для реакции обратной транскрипции использовали набор реагентов QuantiTect (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколом производителя и 1 мкг суммарной РНК
A new 37 KDa AAT N-terminus truncated isoform was detected in the nuclear extracts of some prostate tumor cell lines
Summary
Культивируемые линии опухолей предстательной железы человека DU145, PC-3, LNCaP и суммарная РНК из клеток иммортализованной линии нормального эпителия предстательной железы человека RWPE-1 предоставлены сотрудниками Российского онкологического научного центра имени Н.Н. Суммарную РНК из клеток культивируемых линий выделяли в соответствии с протоколом производителя реагента TRIzol (Life Technologies-Invitrogen, США). Для реакции обратной транскрипции использовали набор реагентов QuantiTect (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколом производителя и 1 мкг суммарной РНК. Для контроля отсутствия геномной ДНК в препаратах РНК использовали реакционные смеси без добавления обратной транскриптазы. ПЦР-РВ проводили с набором реагентов Maxima SYBR Green qPCR Master Mix (2X) (Thermo Fisher Scientific, США) в термоциклере CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, США), объем реакционной смеси — 20 мкл. 1 мкг очищенной суммарной РНК из клеточных линий, обработанной ДНКазой I (Thermo Fisher Scientific, США), использовали для реакции обратной транскрипции с ревертазой SuperScript III Reverse Transcriptase (Life Technologies-Invitrogen, США), праймер — олигонуклеотид 5¢-GTGCCCTTCGTGCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTNNN-3¢, объем реакционной смеси — 20 мкл. Выделяли из 1,5% агарозного геля с помощью набора реагентов MinElute Gel Extraction Kit (QIAGEN, Германия) в соответствии с протоколом производителя и секвенировали
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Free) 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
